މިހާރު†މިހާރުގެ އެޑްރެސް: OX11 0DE، UK، ޑައިމަންޑް ބިލްޑިންގ، ހާރވެލް ސައިންސް އެންޑް އިނޮވޭޝަން ޕާކް، ޑައިޓްކޯޓް، އޮކްސްފޯޑްޝަޔަރ، ޔޫކޭ، ޑައިމަންޑް ލައިޓް ސޯސް ކޯ، ލިމިޓެޑް، އިލެކްޓްރޯނިކް ބަޔޮލޮޖިކަލް އިމޭޖިންގ ސެންޓަރ.
ރިއެކްޝަން ސެންޓަރ ލައިޓް ހާރވޭސްޓިންގ ކޮމްޕްލެކްސް 1 (RC-LH1) އަކީ ޕާޕަލް ފޮޓޯޓްރޮފިކް ބެކްޓީރިއާގެ މައިގަނޑު ފޮޓޯސިންތެޓިކް ކޮމްޕޮނެންޓެވެ. އަޅުގަނޑުމެން ތަޢާރަފްކުރީ ރޮޑޮޕްސޫޑޯމޮނަސް ޕެލަސްޓްރިސް އިން ލިބުނު އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސްގެ ދެ ކްރައިއޯ-އިލެކްޓްރޯން މައިކްރޯސްކޯޕީ ސްޓްރަކްޗަރ އެވެ. RC-LH114-W ކޮމްޕްލެކްސްގެ 2.65-Å ރިޒޮލިއުޝަން ސްޓްރަކްޗަރ އެކުލެވިގެންވަނީ RC ވަށައިގެންވާ 14 ސަބްޔުނިޓް LH1 ލޫޕް އިން ކަމަށާއި، މިއީ ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އިން މެދުކަނޑާލާފައިވާ ކޮމްޕްލެކްސް އެއް ކަމަށާއި، ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ނެތް ކޮމްޕްލެކްސް އަކީ މުޅިން އާރްސީ ކޮމްޕޮޒިޝަން ކަމަށް އާރްސީ އިން ވަށާލެވިފައިވާ ކަމަށެވެ. ބަންދުކޮށްފައިވަނީ 16 ސަބްޔުނިޓް އެލްއެޗް1 ލޫޕް އެވެ. މި ސްޓްރަކްޗަރތައް އަޅާކިޔުމުން އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސްގައި ކުއިންއޯންގެ ޑައިނަމިކްސް އާއި ބެހޭ ގޮތުން ވިސްނުންތަކެއް ލިބިގެންދާއިރު، ކުރިން ކަނޑައެޅިފައި ނުވާ ކޮންފޯމަޝަނަލް ބަދަލުތައް އާރްސީ ކިއުބީ ސައިޓްގައި ކުއިންއޯން ބައިންޑް ކުރާއިރު، އަދި އެހީތެރި ކުއިންއޯން ބައިންޑިންގ ސައިޓްތައް ހުންނަ ލޮކޭޝަން ވެސް ހިމެނެއެވެ. ޑަބްލިއު ޕްރޮޓީންގެ ޚާއްޞަ އޮނިގަނޑުގެ ސަބަބުން އެލްއެޗް1 ލޫޕް ބަންދުވުން ހުއްޓުވައި، މިކަމުގެ ސަބަބުން ކިނޯން/ކުއިންލޯން ބަދަލުވުން އަވަސްކުރުމަށް ޗެނަލެއް އުފެދެއެވެ.
ފޮޓޯސިންތެސިސްގެ ސަބަބުން ލިބޭ ހަކަތައަކީ ދުނިޔޭގައި ގާތްގަނޑަކަށް ހުރިހާ ދިރޭތަކެއްޗެއް ދެމެހެއްޓޭނެ ހަކަތައެއް ކަމަށާއި، ސޯލާ ބަޔޯޓެކްނޮލޮޖީއަށް ވެސް ބޮޑު ފުރުސަތެއް ލިބިފައިވާ ހަކަތައެކެވެ. ގްލޯބަލް ފޮޓޯސިންތެސިސް ޕްރޮމޯޓް ކުރާއިރު، ޕާޕަލް ފޮޓޯޓްރޮފިކް ބެކްޓީރިއާ އިން ވެސް ތަފާތު ހަކަތަ މޯޑްތަކާއި މެޓަބޮލިކް ކެޕޭސިޓީތައް ދައްކަ އެވެ. އެއީ ފޮޓޯސިންތެސިސް އިން ސަލާމަތްވެ، އަނދިރީގައި ހެޓެރޯޓްރޮފިކް ބެކްޓީރިއާގެ ގޮތުގައި ބޮޑުވެ، ނައިޓްރޯޖަން އާއި ކާބަން ޑައިއޮކްސައިޑް ފިކްސްކޮށް، ހައިޑްރޯޖަން އުފައްދައި، އެރޮމެޓިކް ކޮމްޕައުންޑްތައް ޑިގްރޭޑް ކުރެވޭ އެއްޗެހިތަކެކެވެ (1-3). މި ޕްރޮސެސްތަކަށް ހަކަތަ ފޯރުކޮށްދިނުމަށްޓަކައި އަލި އަވަހަށް އަދި ރަނގަޅަށް ކެމިކަލް ހަކަތައަށް ބަދަލުކުރަން ޖެހެއެވެ. މި ޕްރޮސެސް ފެށެނީ އަލި ޓްރެޕް ކުރާ އެންޓެނާ ކޮމްޕްލެކްސް އިން އަލި ޖަހައިގަނެ، ޓްރެޕް ކުރެވިފައިވާ ހަކަތަ ރިއެކްޝަން ސެންޓަރ (RC) އަށް ބަދަލުވުމުން، މިކަމުގެ ސަބަބުން ޗާޖް ވަކިވުން ފެށެއެވެ (4 – 7). ޕާޕަލް ފޮޓޯޓްރޮފިކް ބެކްޓީރިއާގައި ފޮޓޯސިންތެސިސްގެ އަސާސީ ޔުނިޓް އެކުލެވިގެންވަނީ ޓައިޕް 2 އާރްސީ އިން ކަމަށާއި، އޭގެ ވަށައިގެން ލައިޓް ހާރވޭސްޓިންގ ކޮމްޕްލެކްސް 1 (LH1) އުފެދި، RC-LH1 ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސް އުފެދެއެވެ. LH1 އުފެދެނީ ކައްސާލާފައިވާ αβ ހެޓެރޯޑައިމަރސްގެ ޖަމާއަތަކުން ކަމަށާއި، މިއިން ކޮންމެ އެއްޗަކުން ދެ ބެކްޓީރިއަލް ކްލޮރޯފިލް (BChl) a މޮލިކިއުލް އާއި އެއް ނުވަތަ ދެ ކެރޮޓީނޮއިޑް ގުޅިފައިވެއެވެ (8-12). އެންމެ ސާދާ LH1 އެންޓެނާ އެކުލެވިގެންވަނީ ބަންދު ލޫޕެއްގައި RC (9-13) ވަށާލާފައިވާ 16 ނުވަތަ 17 αβ ހެޓެރޯޑައިމަރސް އިން ނަމަވެސް އެހެން ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސްތަކުގައި ޓްރާންސްމެމްބަރޭން ޕެޕްޓައިޑްސް އިން ވަށައިގެންވާ LH1 ގެ ކޮންޓިނިއުޓީ މެދުކަނޑާލައެވެ, މިކަމުގެ ސަބަބުން RC އާއި ސައިޓޮކްރޯމް bc1 ކޮމްޕްލެކްސް އާއި ދެމެދު ކުއިންއޯލް/ކުއިންއޯން ޑިފިއުޝަން ކުރިއަރުވައެވެ (11, 13-15). ޕަރޕްލް ފޮޓޯޓްރޮފިކް ޕްލާންޓް ރޮޑޮޕްސޫޑޯމޮނަސް (Rps.) އަކީ ފޮޓޯސިންތެސިސް އަށް އެހީތެރިވެދޭ ހަކަތައާއި އިލެކްޓްރޯން ޓްރާންސްފާ ވިސްނޭ މޮޑެލް ޖަރާސީމެކެވެ. ފުރަތަމަ ކްރިސްޓަލް ސްޓްރަކްޗަރ އާރްޕީއެސް. ޕެލަސްޓްރިސް އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސްގެ މޮޑެލަކީ އާރްސީ ކަމަށާއި، އޭގެ ވަށައިގެން 15 ހެޓެރޯޑައިމެރިކް އެލްއެޗް1 ލޫޕް އުފެދިފައިވާއިރު، މި ލޫޕްތައް މެދުކަނޑާލަނީ “ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު” ކިޔާ ނޭނގޭ ޕްރޮޓީނަކުންނެވެ (14). އޭގެ ފަހުން ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ދެނެގަނެވުނީ RPA4402 ގެ ގޮތުގައި ކަމަށާއި، މިއީ ތިން ޕްރިޑިކްޓެޑް ޓްރާންސްމެމްބަރޭން ހެލިސެސް (TMH) އާއި އެކު ސިފަ ނުކުރެވޭ 10.5kDa ޕްރޮޓީން އެކެވެ (16). އަޅުގަނޑުމެން ހުށަހަޅަނީ RC-L، M (pufL, pufM) އަދި LH1α، β (pufA, pufB) ސަބްޔުނިޓްތައް އިންކޯޑްކުރާ ޖީންތަކަށް ބޭނުންކުރާ ނަންކިޔުމާ އެއްގޮތްވާ ގޮތަށް ޕްރޮޓީން W އިންކޯޑްކުރާ rpa4402 ޖީންގެ ނަން pufW އަށް ބަދަލުކުރުމަށެވެ. ޝައުގުވެރިވާ ކަމަކީ ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ހުންނަނީ ހަމައެކަނި އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ގެ ގާތްގަނޑަކަށް %10 ގައި ކަމުން އާރްޕީއެސް ހާމަވެއެވެ. palustris އިން އުފައްދަނީ ތަފާތު ދެ RC-LH1 ކޮމްޕްލެކްސް އެވެ. މިތަނުގައި، އަޅުގަނޑުމެން ރިޕޯޓް ކުރަނީ ދެ ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސްއެއްގެ ހައި ރިޒޮލިއުޝަން ކްރައިއޯ-އީއެމް (ކްރައިއޯ-އީއެމް) ސްޓްރަކްޗަރސް، އެއް ކޮމްޕްލެކްސްގައި ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އަދި 14 αβ ހެޓެރޯޑައިމަރސް، އަނެއް ކޮމްޕްލެކްސް ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު ނެތް އަދި ބަންދު 16 ހެޓެރޯޑައިމަރ އެލްއެޗް1 ލޫޕް. އަޅުގަނޑުމެންގެ ސްޓްރަކްޗަރ ތަމްސީލުކުރަނީ އާރްޕީއެސްގެ އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސް އަށް ވިސްނުމަށް އަންނަ ފިޔަވަޅެއްގެ ބަދަލެކެވެ. palustris، ސަބަބަކީ އަޅުގަނޑުމެން ކޮންމެ ވައްތަރެއްގެ ހޯމޯޖީނިއަސް ޕޮޕިއުލޭޝަން ތަޙުލީލުކޮށް، ކޮންމެ ޕެޕްޓައިޑަކާއި ބައުންޑް ޕިގްމެންޓްތަކާއި ގުޅުންހުރި ލިޕިޑްތަކާއި ކުއިންއޯންސް ސާފުކޮށް ޙަވާލުކުރެވޭ ވަރަށް ރިޒޮލިއުޝަން ލިބިފައި ވާތީއެވެ. މި ސްޓްރަކްޗަރތައް އަޅާކިޔާއިރު މިހާތަނަށް އެހެން އެއްވެސް އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސްއަކުން ނުފެންނަ ތިން ޓީއެމްއެޗް ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު އިން ކިނޯން/ކުއިންލޯން ބަދަލުވުން އަވަސްކުރުމަށް ކުއިންއޯން ޗެނަލެއް އުފައްދައެވެ. ގިނަ އަދަދެއްގެ ކޮންޒަރވްޑް ލިޕިޑް އަދި ކިނޯން ބައިންޑިންގ ސައިޓްތައް ދެނެގަނެވިފައިވާއިރު، ކުއިންއޯން އާއި އާރްސީ އެއްކުރުމަށްފަހު އާ ކޮންފޯރމަޝަނަލް ބަދަލެއް އަޅުގަނޑުމެންނަށް ހާމަވެފައިވެއެވެ. އަޅުގަނޑުމެންގެ ހޯދުންތަކުން ޕާޕަލް ފޮޓޯޓްރޮފިކް ބެކްޓީރިއާގެ އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސްގައި ކިނޯން/ކުއިންލޯން ބައިންޑިންގ އަދި އެކްސްޗޭންޖްގެ ކައިންޓިކްސްއާ ބެހޭގޮތުން އާ ވިސްނުންތަކެއް ލިބިގެންދެއެވެ.
އާރުޕީއެސް އިން ފެންނަ ދެ ކޮމްޕްލެކްސްގެ ތަފްސީލީ ދިރާސާއަކަށް މަގުފަހިކުރުމުގެ ގޮތުންނެވެ. palustris، އަޅުގަނޑުމެން ކޮންމެ RC-LH1 އެއް ބަޔޯކެމިކަލް އުސޫލުތަކުން އެކަހެރިކުރަމެވެ. ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު ނެތް ކޮމްޕްލެކްސް (މިހާރު ΔpufW ގެ ނަމުން ނަންދެވިފައިވާ) ޕަފްޑަބްލިއު ޖީން ނެތް ސްޓްރޭން އިން ޕިއުރިފައި ކުރެވުނު (16)، އަދި އުފެއްދިދާނެ އެންމެ އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސް އެވެ. ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު ހިމެނޭ ކޮމްޕްލެކްސް އުފައްދަނީ ސްޓްރޭން އަކުންނެވެ. މި ސްޓްރޭންގެ ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އޭގެ ސީ ޓާރމިނަސްގައި 10x His ޓެގް ޖަހައިގެން ބަދަލުކޮށްފައިވާތީ، ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު ހިމެނޭ ކޮމްޕްލެކްސް މެޓަލް އިމޮބިލައިޒްކޮށްގެން ގިނަ ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އާއި އެކު ފައިދާހުރި ގޮތެއްގައި ގުޅިދާނެއެވެ. މި ކޮމްޕްލެކްސް ވަކިކުރެވިފައިވަނީ ފައިދާހުރި ގޮތެއްގައި (16) އެފިނިޓީ ކްރޮމެޓޮގްރަފީ (އައިއެމްއޭސީ) އެވެ.
ފޮޓޯ 1 ގައިވާ ފަދައިން ދެ ކޮމްޕްލެކްސްގައި ވެސް ތިން ސަބް ޔުނިޓް އާރްސީ (RC-L, RC-M އަދި RC-H) އެއް ވަށައިގެން އެލްއެޗް1 އެންޓެނާއެއް ހުރެއެވެ. ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ނެތް ކޮމްޕްލެކްސްގެ 2.80-އޭ ސްޓްރަކްޗަރ އިން 16 αβ ހެޓެރޯޑައިމަރސް ފެންނައިރު، މިއީ މުޅިން އާރްސީ ވަށައިގެން ބަންދުކޮށްފައިވާ އެލްއެޗް1 ލޫޕް އެއް އުފެދި، މިހާރު ކިޔާނީ އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ކޮމްޕްލެކްސް އެވެ. ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިޔު ހިމެނޭ ކޮމްޕްލެކްސްގެ 2.65Å ސްޓްރަކްޗަރގައި ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު އިން މެދުކަނޑާލާފައިވާ 14 ހެޓެރޯޑައިމަރ LH1 އެއް ހުންނައިރު، މިހާރު ކިޔާނީ RC-LH114-W އެވެ.
(އޭ އަދި ބީ) ކޮމްޕައުންޑްގެ ސަރަހައްދު ތަމްސީލުކުރުން. (ސީ އަދި ޑީ) ރޮޑްތަކުގައި އެކްސްޕްރެސް ކުރެވޭ ބޮންޑްޑް ޕިގްމެންޓްސް. (އީ އަދި އެފް) ސައިޓޯޕްލާސްމިކް ސަރަހައްދުން ފެންނަ ކޮމްޕްލެކްސްތަކުގައި ކާޓޫންތަކުގައި ތަމްސީލުކޮށްފައިވާ ޕެޕްޓައިޑްތަކާއި އެލްއެޗް1 ސަބްޔުނިޓްތައް ހުންނައިރު، ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ގޭޕް އިން ގަޑިއަށް ނަންބަރު ޖަހާފައި ހުރެއެވެ [އާރްބީއޭ ނަންބަރު ދިނުމާ އެއްގޮތަށެވެ. ސްފެރޮއިޑްސް ކޮމްޕްލެކްސް (13)]. LH1-α އަށް ޕްރޮޓީން ސަބްޔުނިޓްގެ ކުލައަކީ ރީނދޫ ކުލައެވެ؛ LH1-β އަށް ޕްރޮޓީން ސަބްޔުނިޓްގެ ކުލައަކީ ކަޅުކުލައެވެ؛ ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު އަށް، ޕްރޮޓީން ރަތްކުލައެވެ؛ އާރްސީ-އެޗް އަށް ބަލާއިރު، އެއީ ސައިއަން އެވެ؛ އާރްސީ-އެލް އަށް، އެއީ އޮރެންޖް؛ އާރްސީ-އެމް އަށް، މެޖެންޓާ އެވެ. ކޯފެކްޓަރސް ތަމްސީލުކުރަނީ ރޮޑްތަކުން، ފެހި ކުލައިން ދައްކުވައިދެނީ BChl އަދި BPh a މޮލިކިއުލްތަކާއި، ޕަރޕްލް އިން ދައްކުވައިދެނީ ކެރޮޓީނޮއިޑްސް އަދި ރީނދޫ ކުލައިން ދައްކުވައިދެނީ UQ10 މޮލިކިއުލްތަކެވެ. (ޖީ އަދި އެޗް) އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ކޮމްޕްލެކްސް (ޖީ) އަދި އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ކޮމްޕްލެކްސް (އެޗް) ގެ އެއްވަރުގެ ސަރަހައްދުގައިވާ ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ގޭޕްގެ މެގްނިފައިޑް ވިއު. ކޯފެކްޓަރސް ދައްކާފައިވަނީ ސްޕޭސް ފިލިންގ ގެ ސިފައިގައި، ކިލެޓެޑް ކުއިންއޯން ދައްކާފައިވަނީ ބްލޫ ކުލައިންނެވެ. ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ގޭޕް ފާހަގަކޮށްފައިވަނީ (ޖީ) ގައިވާ ކަޅު ކުލައިގެ ޑޭޝް ލައިނަކުން ކަމަށާއި، LH116 ރިންގުގައި ކުއިންއޯން/ކުއިންލޯލް ޑިފޫސްވާ ކުދި ލޯވަޅުތައް (H) ގައި ކަޅު ޑޭޝް ލައިނަކުން ފާހަގަކޮށްފައިވެއެވެ.
ފޮޓޯ 1 (އޭ އަދި ބީ) އިން ފެންނަނީ އާރްސީ ވަށައިގެން LH1αβ ހެޓެރޯޑައިމަރސްގެ ހުޅުވިފައިވާ ނުވަތަ ބަންދުކޮށްފައިވާ އެރޭތަކެއް ކަމަށާއި، މިއިން ކޮންމެ ހެޓެރޯޑައިމަރސް އެއް ގުޅިފައިވަނީ ދެ BChl އަދި އެއް ކެރޮޓީނޮއިޑް ( ފޮޓޯ 1، C އަދި D ) ގައެވެ. މީގެ ކުރިން ކުރެވުނު ދިރާސާތަކުން ދައްކާ ގޮތުގައި އާރްޕީއެސް އަކީ އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސް އެވެ. ސްޕައިރޫލިނާ ކްސަންތިންގެ ބަޔޯސިންތެޓިކް މަގުގައި މި ބާވަތްތަކުގައި ކެރޮޓީނޮއިޑްސްގެ މިކްސްޑް ޕޮޕިއުލޭޝަންތައް ހުރެއެވެ ( 17 ). ނަމަވެސް ސްޕައިރޮޕައިރޮކްސަންތިން އަކީ ޑޮމިނޭންޓް ކެރޮޓީނޮއިޑް ކަމަށާއި އޭގެ ޑެންސިޓީ ހިތްހަމަޖެހޭ ކަމަށް ވެސް ޑރ. އެހެންކަމުން އަޅުގަނޑުމެން އިޚްތިޔާރުކުރީ އެލްއެޗް1 ބައިންޑް ކުރާ ހުރިހާ ސައިޓްތަކެއްގައި ސްޕައިރޮކްސަންތިން މޮޑެލް ކުރުމަށެވެ. އަލްފާ އަދި ބީޓާ ޕޮލިޕެޕްޓައިޑްސް އަކީ ކުރު މެމްބަރޭން ބޭރު ސަރަހައްދުތަކެއް ހުންނަ އެއް ޓީއެމްއެޗް ތަކެކެވެ ( ފޮޓޯ 1، އޭ، ބީ، އީ، އަދި އެފް ). ސީ-ޓާރމިނަސްގައި 17 ރެސިޑިއުސްގެ ޑެންސިޓީ ނުފެނުނު ނަމަވެސް، ދެ ކޮމްޕްލެކްސްގައި ވެސް އަލްފާ ޕޮލިޕެޕްޓައިޑް މެޓް1 އިން Ala46 އަށް ކްލީވް ވެފައިވެއެވެ. β ޕޮލިޕެޕްޓައިޑް RC-LH116 ގައި Gly4 އިން Tyr52 އަށް އަދި RC-LH114-W ގައި Ser5 އިން Tyr52 އަށް ދަށްވެފައިވެއެވެ. 3 ނުވަތަ 4 އެން-ޓާރމިނަލް ނުވަތަ 13 ސީ-ޓާރމިނަލް ރެސިޑިއުސްގެ ޑެންސިޓީއެއް ނުފެނުނެވެ (ފޮޓޯ S1). ވައިލްޑް ޓައިޕް ސްޓްރޭން އިން ތައްޔާރުކުރި މިކްސްޑް އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސްގެ މާސް ސްޕެކްޓްރޯމެޓްރީ އެނަލިސިސް އިން ދައްކާ ގޮތުގައި ގެއްލިފައިވާ ސަރަހައްދަކީ މި ޕެޕްޓައިޑްތަކުގެ ހެޓެރޮލޮގަސް ކްލީވޭޖްގެ ނަތީޖާއެވެ ( ފޮޓޯ S1 އަދި S2 ). އަދި α-Met1 ގެ N-terminal ފޯރމިލޭޝަން ވެސް ފެނިފައިވެއެވެ (f). މި ތަޙުލީލުން ދައްކާ ގޮތުގައި α-ޕެޕްޓައިޑް އެކުލެވިގެންވަނީ fMet1 އިން Asp42/Ala46/Ala47/Ala50 އަށް ރެސިޑިއުސް އިން ކަމަށާއި، β-ޕެޕްޓައިޑް އެކުލެވިގެންވަނީ Ser2 އިން Ala53 އަށް ރެސިޑިއުސް އިން ކަމަށާއި، މިއީ ލޯ ޓެމްޕަރޭޗަރ އީއެމް ޑެންސިޓީ މެޕާ ރަނގަޅަށް އެއްބަސްވާ ކަމެއް ކަމަށެވެ.
α-His29 އަދި β-His36 ގެ ކޯޑިނޭޝަންގެ ސަބަބުން ބީސީއެލްސް ފޭސް ޓު ފޭސް ވެއެވެ؛ ކޮންމެ αβ ހެޓެރޯޑައިމަރ އެއް އޭގެ އަވަށްޓެރިންނާއެކު އެއްވެ އާރްސީގެ ވަށައިގެން އޯޕަން ލޫޕް (RC-LH114-W) ނުވަތަ ކްލޯޒްޑް ލޫޕް (RC-LH116) އެއް އުފެދެއެވެ. RC-LH114-W ގެ 877 ނޯޓް މީޓަރުގެ ބޭންޑާ އަޅާބަލާއިރު، RC-LH116 ގެ 880 ނޯޓް މީޓަރުގެ އެބްސޯޕްޝަން ރެޑް ޝިފްޓް އަކީ 3 ނޯޓް މީޓަރެވެ ( ފޮޓޯ 2އޭ ). ނަމަވެސް ސާރކިއުލަރ ޑައިކްރޮއިޒަމް ސްޕެކްޓްރަމް ގާތްގަނޑަކަށް އެއްގޮތް (ފޮޓޯ 2ބީ) އިން ދޭހަވަނީ އޯޕަން ލޫޕް އާއި ކްލޯޒްޑް ލޫޕް އާއި ދެމެދު ސާފު ތަފާތެއް ހުރި ނަމަވެސް ބީސީއެލްސްގެ ލޯކަލް މާހައުލު ވަރަށް ވައްތަރު ކަމެވެ. އެބްސޯޕްޝަން ރެޑްޝިފްޓަކީ ތަމަލް މޮޝަން ދަށްވުމާއި ބަންދު ލޫޕްގައި ސްޓެބިލިޓީ އިތުރުވުމުގެ ނަތީޖާ (18، 19)، ބަންދު ލޫޕް (20، 21) ގެ ސަބަބުން ޕިގްމެންޓް ކަޕްލިންގ އަށް އަންނަ ބަދަލު (20، 21)، ނުވަތަ މި ދެ އަސަރު އެއްކޮށްލުމުގެ ނަތީޖާއަކަށް ވެދާނެއެވެ (11).
(އ) އަލްޓްރާވައިލެޓް/ވިޒިބަލް/ނިއަރ-އިންފްރާރެޑް އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރަމް، އޭގެ ޕީކްތައް އެއަށް ގުޅޭ ޕިގްމެންޓްތަކުން ފާހަގަކޮށް، 775 ނޯޓް މީޓަރުގައި ބީޕީއެޗް ޕީކަށް ނޯމަލައިޒް ކުރެވިފައިވެއެވެ. (ބ) 805 ނޯޓް މީޓަރުގައި ބީސީއެލް އެބްޒޯރބަންސް އަށް ނޯމަލައިޒް ކުރެވިފައިވާ ސާރކިއުލަރ ޑައިކްރޮއިޒަމް ސްޕެކްޓްރަމް. (C އަދި D) RC-LH114-W ކޮމްޕްލެކްސް (C) އަދި RC-LH116 ކޮމްޕްލެކްސް (D) ގެ ޓައިމް ރިޒޮލްވްޑް އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރާއިން ހޮވާފައިވާ ΔA ސްޕެކްޓްރާއެވެ. ރަނގަޅު އަޅާކިޔުމަށްޓަކައި ހުރިހާ ސްޕެކްޓްރާއެއް ނޯމަލައިޒް ކުރެވެނީ 0.2 ޕީއެސް ގައި −A ގެ ∆A އަށެވެ. (އީ) ޔޫކިއު2 ގެ އެކި ކޮންސެންޓްރޭޝަންތަކުގެ ޙާޟިރުގައި އިރެޑިއޭޝަނަށްފަހު ސައިޓޮކްރޯމް ސީ2 އޮކްސިޑޭޝަންގެ ރޭޓް (ރޯ ޑޭޓާއަށް ފޮޓޯ S8 ބައްލަވާށެވެ). (އެފް) ލޯ، މީޑިއަމް ނުވަތަ ހައި އިންޓެންސިޓީ ލައިޓް (10، 30 ނުވަތަ 300μMm-2 s-1) ގެ ދަށުން ހެދިފައިވާ ސެލްތަކުގައި، ޕިއުރިފައިޑް ކޮމްޕްލެކްސްގައި ހުންނަ ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އަދި އާރްސީ-އެލް ސަބްޔުނިޓްތަކާއި ވަކިކޮށްފައިވާ މެމްބަރޭން ރޭޝިއޯ އެވެ. އެސްޑީއެސް-ޕޮލިއެކްރިލަމައިޑް ޖެލް އިލެކްޓްރޯފޯރެސިސް އަދި އިމިއުނޯއެސޭ އިން ޕްރޮޓީންގެ މިންވަރު ކަނޑައެޅުން (ރޯ ޑޭޓާއަށް ފޮޓޯ S9 ބައްލަވާ). ޕިއުރިފައިޑް އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ކޮމްޕްލެކްސް އަށް ނިސްބަތްކޮށް ނިސްބަތް ކަނޑައެޅުން. މި ކޮމްޕްލެކްސްގެ އާރްސީ-އެލް އާއި ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ގެ ސްޓޮކިއޮމެޓްރިކް ރޭޝިއޯ އަކީ 1:1 އެވެ.
RC-LH114-W (ފޮޓޯ 1، އޭ، ސީ، އަދި އީ) ގެ ޑިފޯރމްޑް αβ14 ލޫޕްގައިވާ ޕޮޒިޝަން 1 ގައި ހުންނަ BChls ތައް RC-LH116 ގައިވާ އެއްވަރުގެ BChls އަށްވުރެ 6.8Å އާއި RC ޕްރައިމަރީ ޑޯނަރ (P) އާއި ކައިރިވެއެވެ (ފޮޓޯ 1، B، D، އަދި F، އަދި ފޮޓޯ S3)؛ ނަމަވެސް މި ދެ ކޮމްޕްލެކްސްގެ ޓްރާންސިއެންޓް އެބްސޯޕްޝަން ކައިންޓިކްސް އިން ދައްކާ ގޮތުގައި RC-LH114-W އަދި RC-LH116 އަށް LH1 އިން RC އަށް އެކްސައިޓޭޝަން އެނާޖީ ޓްރާންސްފާ ޓައިމް ކޮންސްޓަންޓްސް އަކީ 40 ±4 އަދި 44±3 ps އެވެ (ފޮޓޯ 2). , ސީ އަދި ޑީ، ފޮޓޯ S4 އަދި ތާވަލް S2). އަދި އާރްސީގެ ތެރޭގައި އިލެކްޓްރޯނިކް ޓްރާންސްފާގައި ވެސް މާބޮޑު ތަފާތެއް ނުފެނެއެވެ (ފޮޓޯ S5 އަދި އެއާ ގުޅުންހުރި ސަޕްލިމެންޓަރީ ޓެކްސްޓް). އަޅުގަނޑުމެންނަށް ޝައްކުކުރެވެނީ އެލްއެޗް1 އާއި އާރްސީ-ޕީ އާއި ދެމެދު ހަކަތަ ޓްރާންސްފާ ޓައިމް އާއި ގާތް ގުޅުމެއް އޮންނަނީ އެލްއެޗް1 ގެ ދެ ލޫޕްގައި ގިނަ ބީސީއެލްގެ ދުރުމިނާއި އެންގްލް އަދި ޕޮޓެންޝަލް އެނާޖީ އެއްގޮތްވުމުން ކަމަށެވެ. ހީވަނީ އެންމެ ކުޑަ ދުރުމިނަށް ވާސިލްވުމަށްޓަކައި އެލްއެޗް1 ހަކަތަ ޕެޓަރން ހޯދުމަކީ ސަބްއޮޕްޓިމަލް ސައިޓްތަކުން އާރްސީއަށް ސީދާ ހަކަތަ ޓްރާންސްފާ ކުރުމަށްވުރެ އަވަސް ކަމެއް ނޫންހެންނެވެ. RC-LH114-W ގައިވާ އޯޕަން ލޫޕް LH1 ލޫޕް އަށް ވެސް ސްޓްރަކްޗަރަލް އެނަލިސިސް އަށް ދަށް ޓެމްޕަރޭޗަރ ޝަރުޠުތަކުގައި މުހިންމު ނޫން ތަމަލް މޮޝަން އެއް ކުރިމަތިވެދާނެ ކަމަށާއި، RC 1 ގެ މަޤާމުގައި ހުންނަ βBChls ގެ ޕިގްމެންޓޭޝަން ދުރުމިނުން ކޮޓަރީގެ ފިނިހޫނުމިނުގައި ދިގު αβ14 ރިންގް ކޮންފޯމަޝަން އެއް ހުރެދާނެ ކަމަށެވެ.
އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ކޮމްޕްލެކްސްގައި 32 ބީސީއެޗްއެލްސް އަދި 16 ކެރޮޓީނޮއިޑްސް ހިމެނޭއިރު، އޭގެ ޖުމްލަ އިންތިޒާމަކީ ތަރމޯކްރޮމެޓިއަމް (Tch.) ޕިޑްޕިޑަމް [ޕްރޮޓީން ޑޭޓާ ބޭންކް (ޕީޑީބީ) އައިޑީ 5ވައި5އެސް] (9)، ތިއޮރޮޑޯވިބްރިއޯ (Trv.) 970 ސްޓްރޭން ( ޕީޑީބީ އައިޑީ 7C9R) (12) އަދި ފެހި ކުލައިން ލިބޭ ތަރުތީބެކެވެ އަލްގޭ (Blc.viridis) (ޕީޑީބީ އައިޑީ 6ET5) (10) އެވެ. އެލައިންމަންޓަށްފަހު αβ ހެޓެރޯޑައިމަރސްގެ މަޤާމުތަކުގައި ޚާއްޞަކޮށް 1-5، 15، އަދި 16 ގައި ކުދިކުދި ޑިވިއޭޝަންތައް ފެނިފައިވެއެވެ (ފޮޓޯ S6). ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ހުރުމަކީ އެލްއެޗް1 ގެ އޮނިގަނޑަށް ވަރަށް ބޮޑު އަސަރެއް ކުރާ ކަމެކެވެ. އޭގެ ތިން ޓީއެމްއެޗް ގުޅިފައިވަނީ ކުރު ލޫޕްތަކެއްގެ ސަބަބުން ކަމަށާއި، ކޮމްޕްލެކްސްގެ ލޫމެން ފަރާތުގައި އެން-ޓާރމިނަލް އަދި ސައިޓޯޕްލާސްމިކް ފަރާތުގައި ސީ-ޓާރމިނަލް ހުންނަ ކަމަށް ވެސް ވެއެވެ (ފޮޓޯ 1އޭ އަދި 3، އޭ އިން ޑީ އަށް). ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު އަކީ ބޮޑުތަނުން ހައިޑްރޯފޮބިކް އެއްޗެއް (ފޮޓޯ 3ބީ) ކަމަށާއި، ޓީއެމްއެޗް2 އަދި ޓީއެމްއެޗް3 އިން LH1αβ-14 އާއި މުއާމަލާތްކޮށްގެން ޓްރާންސްމެމްބަރޭން ސަރފޭސްއެއް އުފެދެއެވެ (ފޮޓޯ 3، ބީ އަދި އީ އިން ޖީ) އެވެ. މި އިންޓަރފޭސް މައިގަނޑު ގޮތެއްގައި އެކުލެވިގެންވަނީ ޓްރާންސްމެމްބަރޭން ސަރަހައްދުގައި ހުންނަ Phe، Leu އަދި Val ރެސިޑެއިންސް އިންނެވެ. މި ރެސިޑެއިންސް ތަކުގައި ހައިޑްރޯފޮބިކް އެމިނޯ އެސިޑްތަކާއި αβ-14 ޕިގްމެންޓްތައް އެއްކޮށް ހުރެއެވެ. ބައެއް ޕޯލާރ ރެސިޑިއުސް ވެސް މި މުޢާމަލާތަށް ބާރުފޯރުވާއިރު، އޭގެ ތެރޭގައި ކޮމްޕްލެކްސް ކެވިޓީގެ މަތީގައި W-Thr68 އާއި β-Trp42 އާއި ދެމެދު ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑް އުފެދިފައިވެއެވެ ( ފޮޓޯ 3، F އަދި G ). ސައިޓޯޕްލާސްމްގެ މަތީގައި Gln34 ހުންނަނީ αβ-14 ކެރޮޓީނޮއިޑްސްގެ ކީޓޯ ގްރޫޕާ ޖެހިގެންނެވެ. މީގެ އިތުރުން n-dodecyl β-d-maltoside (β-DDM) މޮލިކިއުލް ރިޒޮލިއުޓްވެ، އޭގެ ހައިޑްރޯފޮބިކް ޓޭލް ޕްރޮޓީން-W އާއި αβ-14 އާއި ދެމެދުގައިވާ އިންޓަރފޭސް އަށް ދިގުވެ، ލިޕިޑް ޓޭލް ހަށިގަނޑުގައި ހުރެދާނެއެވެ. އަދި ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އަދި އާރްސީއެޗްގެ ސީ-ޓާރމިނަލް ރިޒޮލިއުޝަން ރީޖަންސް ވަރަށް ގާތް ނަމަވެސް ވަކި މުޢާމަލާތްތަކެއް އުފެއްދުމުގެ ދާއިރާގެ ތެރޭގައި ނުވާކަން އަޅުގަނޑުމެންނަށް ފާހަގަކުރެވުނެވެ ( ފޮޓޯ 1، އޭ އަދި އީ ). ނަމަވެސް މި ދެ ޕްރޮޓީންގެ އަންރިޒޮލްވްޑް ސީ-ޓާރމިނަލް އެމިނޯ އެސިޑްތަކުގައި މުޢާމަލާތްތަކެއް ހުރެދާނެ ކަމަށާއި، މިއީ އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ކޮމްޕްލެކްސް އެސެމްބްލީ ކުރާއިރު ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ރިކްރޫޓް ކުރުމަށް މެކޭނިޒަމެއް ލިބިދާނެ ކަމެކެވެ.
(އ) ކާޓޫން ސިފައިގައި LH1αβ14 އާއި އިންޓަރފޭސް އާއި ކުރިމަތިލާ ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ގައި ރޮޑް ޝޭޕްޑް ސައިޑް ޗޭން (ރަތް) އެއް ހުރެއެވެ، ​​މިއީ އިލެކްޓްރޯސްޓޭޓިކް ޕޮޓެންޝަލް ޑައިގްރާމްގެ ބައެއްގައި (0.13 ގެ ކޮންޓޯރ ލެވެލް އެއް ހުންނަ ޓްރާންސްޕޭރެންޓް ގްރޭ ސަރފޭސް) ދައްކާފައިވާ އެއްޗެކެވެ. (ބ) ހައިޑްރޯފޮބިކް ކުލައެއްގެ ސަރަހައްދަކުން ތަމްސީލުކުރާ ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު. ޕޯލާރ އަދި ޗާޖްޑް އޭރިއާތައް ސައިއަން ކުލައިން ދައްކާފައިވާއިރު، ހައިޑްރޯފޮބިކް އޭރިއާތައް ހުދުކުލައިން ދައްކާފައިވާއިރު، ވަރުގަދަ ހައިޑްރޯފޮބިކް އޭރިއާތައް އޮރެންޖު ކުލައިން ދައްކާފައިވެއެވެ. (ސީ އަދި ޑީ) ކާޓޫންގައި ތަމްސީލުކޮށްފައިވާ ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު، އޭގެ އޮރިއެންޓޭޝަން (އޭ) (ސީ) ގައިވާ ގޮތާ އެއްގޮތަށް، އަދި 180° (ޑީ) އިން އެނބުރެއެވެ. ސިކުނޑީގައިވާ މަޤާމަށް ބަލާއިރު، ވަކިކުރެވޭ ރެސިޑިއުސްތައް ރެއިންބޯ ކުލަ ސްކީމެއް ގެންގުޅެއެވެ، ​​މިތަނުގައި އެން-ޓާރމިނަލް އަކީ ކަޅުކުލަ އަދި ސީ-ޓާރމިނަލް ރަތްކުލައެވެ. (އީ) (އޭ) ގައިވާ ގޮތަށް ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު، އަދި ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިޔު:އެލްއެޗް1 ގެ އިންޓަރފޭސްގައި ހުންނަ ރެސިޑިއުސްތައް ދައްކުވައިދެނީ ޖަހާފައިވާ ނިޝާންތައް ހުންނަ ރޮޑްތަކުންނެވެ. (އެފް) ކާޓޫން ރިޕްރެޒެންޓޭޝަންގައި (E) އަދި LH1αβ14 އަށް ނިސްބަތްކޮށް، އަދި ބާރ ރިޕްރެޒެންޓޭޝަންގައިވާ އިންޓަރފޭސް ރެސިޑިއުސް އަށް ނިސްބަތްކޮށް ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު އެނބުރެއެވެ. ބީޓާ ޕޮލިޕެޕްޓައިޑް އިން ލިބޭ އޯވަހެންގިންގ ރެސިޑިއުސް އަށް ލޭބަލް ކުރެވިފައި ހުރެއެވެ. ކޯފެކްޓަރ ދައްކާފައިވަނީ ފޮޓޯ 1 ގެ ކުލައާ އެއްގޮތްވާ ބާރެއްގެ ގޮތުގައި، ޑިކޮމްޕޯސްޑް β-ޑީޑީއެމް ދައްކާފައިވަނީ އަޅިކުލައިން، އަދި އޮކްސިޖަން ދައްކާފައިވަނީ ރަތްކުލައިންނެވެ. (ގ) (އެފް) ގައިވާ މަންޒަރު 180° އެނބުރުވާފައި ހުންނައިރު، ލޭބަލް ކުރެވިފައިވާ އަލްފާ ޕޮލިޕެޕްޓައިޑްގެ ފާހަގަކޮށްލެވޭ ރެސިޑިއުސްތައް ހުރެއެވެ.
ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު އަކީ αβ ހެޓެރޯޑައިމަރެއްގެ ބަދަލުގައި (ފޮޓޯ 1އެފް ގައިވާ 15 ވަނަ) ލޫޕް ބަންދުވުމާއި ފުރަތަމަ ތިން αβ ހެޓެރޯޑައިމަރ ޓިލްޓްވުން ހުއްޓުވާ އެއްޗެކެވެ. ފިލްމް ނޯމަލް އަށް ނިސްބަތްކޮށް ފުރަތަމަ αβ-1 ހެޓެރޯޑައިމަރ ގެ މެކްސިމަމް އިންކްލިނޭޝަން އެންގްލް އަކީ 25° އިން 29° އަށް ކަމަށް ފާހަގަކުރެވުނެވެ (ފޮޓޯ 1، އޭ އަދި އީ)، މިއީ RC A ޝާޕް ކޮންޓްރެސްޓް-LH116 ގައި αβ-1 ގެ 2° އިން 8° އަށް އިންކްލިނޭޝަން ވުމުން އުފެދިފައިވާ އެއްޗެކެވެ (ފޮޓޯ 1، ބީ އަދި އެފް). ދެވަނަ އަދި ތިންވަނަ ހެޓެރޯޑައިމަރސް އިންކްލައިންޑް ވެފައި ހުންނަނީ 12° އާއި 22° އާއި 5° އާއި 10° އާއި ދެމެދުގެ މިންވަރަކަށެވެ. RC ގެ ސްޓޭރިކް ހިންޑްރެންސްގެ ސަބަބުން αβ-1 ގެ ޓިލްޓްގައި αβ ގެ ދެވަނަ ޖޯޑު (މިއީ ފޮޓޯ 1F ގައިވާ 16 ވަނަ αβ އާއި ދިމާވާ އެއްޗެއް) ނުހިމެނޭތީ، LH1 ރިންގުގައި ސާފު ގޭޕެއް އުފެދެއެވެ (ފޮޓޯ 1، އޭ އަދި އީ) . ހަތަރު ބީސީއެޗްއެލް އަދި ދެ ކެރޮޓީނޮއިޑް ގެއްލުމާއެކު ދެ αβ ހެޓެރޯޑައިމަރ ނެތުމުން، އެއްވެސް ކެރޮޓީނޮއިޑެއް ޓްވިސްޓްޑް αβ-1 ސަބްޔުނިޓާ ނުގުޅި، ނަތީޖާއެއްގެ ގޮތުން 13 ކެރޮޓީނޮއިޑް ވެޖެޓޭރިއަން އަދި 28 ބީސީއެޗްއެލް ހިމެނޭ LH114-W އަނގޮޓިއެއް އުފެދެއެވެ. αβ1 އިން 7 އަށް ސަރަހައްދުގައިވާ ދެ ކޮމްޕްލެކްސްގެ ލޯކަލް ރިޒޮލިއުޝަން އެސްޓިމޭޓްތައް LH1 ލޫޕްގެ އެހެން ތަންތަނަށްވުރެ ދަށްވުމުން، މިއީ RC QB ސައިޓާ ޖެހިގެން ހުންނަ LH1 ސަބްޔުނިޓްގެ އިންހެރެންޓް ޕްލާސްޓިސިޓީ ދައްކުވައިދޭ ކަމެކެވެ (ފޮޓޯ 4) .
RC-LH114-W (A އަދި B) އަދި RC-LH116 (C އަދި D) ގެ ތަސްވީރުތައް ދައްކާފައިވަނީ އެއް ޓޮޕް ވިއު/ސައިޑް ވިއު (އޭ އަދި ބީ) (އޭ އަދި ސީ) އަދި ކެވިޓީ ސަރފޭސް އިން ފޮޓޯ 1. (ބީ އަދި ޑީ) އިންނެވެ. ކުލަކުލައިގެ ތަޅުދަނޑިތައް ކަނާތްފަރާތުގައި ދައްކާފައިވެއެވެ.
1:14 ގެ ސްޓޮކިއޮމެޓްރިކް ރޭޝިއޯ އެއް އޮންނަ ހަމައެކަނި އަނެއް ސިފަ ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސް އަކީ ރޮޑޮކޮކަސް ސްފެރޮއިޑެސް (Rba.) RC-LH1-PufX ޑައިމަރ (13) އެވެ. ނަމަވެސް ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އާއި ޕަފްއެކްސް ގައި ފާހަގަކޮށްލެވޭ ހޯމޮލޮޖީއެއް ނެތް ކަމަށާއި، އެތަކެތީގެ އެލްއެޗް1 ސްޓްރަކްޗަރތަކަށް މާބޮޑު އަސަރެއް ކުރާ ކަމަށް ވެސް ޑރ. ޕަފްއެކްސް އަކީ އާރްޕީއެސް އާއި ދިމާވާ މަޤާމެއްގައި އާރްސީ-އެޗް ސަބްޔުނިޓް (13) ގެ ސައިޓޯޕްލާސްމިކް ސައިޑާ މުޢާމަލާތްކުރާ އެން-ޓާރމިނަލް ސައިޓޯޕްލާސްމިކް ޑޮމެއިން އެއް ހުންނަ އެއް ޓީއެމްއެޗް އެކެވެ. ޕަލޫސްޓްރިސް LH116αβ-16 އެވެ. ޕަފްއެކްސް އިން އާރްސީ-އެލްއެޗް1 އާއި ސައިޓޮކްރޯމް ބީސީއެލް ކޮމްޕްލެކްސް އާއި ދެމެދު ކުއިންއޯން/ކުއިންލޯން ބަދަލުކުރުމަށް ޗެނަލެއް އުފައްދައި، ހުރިހާ އާރްބީއޭ އެއްގައި ވެސް ހުރެއެވެ. ސްފެރޮއިޑެސް ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސް (13) އެވެ. މޮނޮމާރ-މޮނޮމާރ އިންޓަރފޭސް ހުންނަނީ Rba ގައި ނަމަވެސް. ސްފެރޮއިޑްސް RC-LH1-PufX ޑައިމަރ ހުންނަނީ RC-LH114-W ގައިވާ ޕްރޮޓީން W ގެ ބައިންޑިންގ ޕޮޒިޝަންގައި ކަމަށާއި، PufX އާއި ޕްރޮޓީން-W އިން އުފެދޭ ގޭޕް ހުންނަނީ އެއްވަރުގެ މަޤާމެއްގައެވެ ( ފޮޓޯ S7A ). RC-LH114-W ގައި ހުންނަ ގޭޕް ވެސް ގުޅިފައިވަނީ ޕްރޮޓީން W ނުވަތަ PufX އާއި ގުޅުން ނެތް ޕެޕްޓައިޑްތަކުން އުފެދޭ ސޫޑޯމޮނަސް ރޯޒިއާ LH1 ގެ ހައިޕޮތެޓިކަލް ކުއިންއޯން ޗެނަލް (8) އާއެވެ ( ފޮޓޯ S7B ). މީގެ އިތުރުން ކުއިންއޯން ޗެނަލް އިން ބ. އެއް γ ސަބްޔުނިޓް (7) ބާކީކޮށްގެން އުފެދޭ ޖަމަލު ފެހިކުލައިގެ LH1 ވެސް ހުންނަނީ މިފަދަ މަޤާމެއްގައެވެ ( ފޮޓޯ S7C ). ތަފާތު ޕްރޮޓީންތަކުގެ މެދުވެރިއަކަށް ވިޔަސް، އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސްގައި އާންމު މަޤާމެއްގައި މި ކުއިންއޯން/ކުއިންލޯލް ޗެނަލްތައް ފެނުމަކީ ކޮންވަރޖެންޓް އިވޮލޫޝަންގެ މިސާލެއް ކަމުގައި ފެންނައިރު، މިއީ ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އިން އުފެދޭ ފަރަގު ކިނޯން ޗެނަލެއްގެ ގޮތުގައި ހަރަކާތްތެރިވެދާނެ ކަމެވެ.
LH114-W ލޫޕްގައިވާ ގޭޕްގެ ސަބަބުން ޕްރޮޓީންތަކުގައި ހުންނަ ފަދައިން ޕްރޮޓީން ޕޯރ މެދުވެރިކޮށް ދެ ޑޮމެއިން ގުޅުވައިލުމުގެ ބަދަލުގައި، RC-LH114-W ކޮމްޕްލެކްސްގެ އެތެރޭގެ ޖާގައާއި ބަލްކް މެމްބަރޭން (ފޮޓޯ 1G) އާއި ދެމެދު ކޮންޓިނިއުއަރ މެމްބަރޭން ރީޖަންއެއް އުފެދުމަށް މަގުފަހިވެއެވެ. އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ކޮމްޕްލެކްސް އަކީ ބަންދުކޮށްފައިވާ ޓީސީ އާއި ވައްތަރު ކޮމްޕްލެކްސްއެކެވެ. ނިޑަލް ކަހަލަ ކޮމްޕްލެކްސް (22) (ފޮޓޯ 1H) އެވެ. މެމްބަރޭން މެދުވެރިކޮށް ކިނޯން ޑިފޫޝަން ހަނި ޕްރޮޓީން ޗެނަލް މެދުވެރިކޮށް ޑިފިއުޝަން އަށް ވުރެ އަވަސް ކަމުން، ހުޅުވިފައިވާ LH114-W ލޫޕް އިން ބަންދު LH116 ލޫޕަށް ވުރެ އަވަހަށް އާރްސީ ޓާނަވަރ އަށް ފުރުސަތު ލިބި، އާރްސީ އަށް ކުއިންއޯން ޑިފޫޝަން މާ ހަނިވެދާނެ އެވެ. ޕްރޮޓީން ޑަބްލިއު އިން އާރްސީ މެދުވެރިކޮށް ކުއިންއޯންސް ބަދަލުވުމަށް އަސަރުކުރާތޯ ޓެސްޓްކުރުމަށްޓަކައި، އަޅުގަނޑުމެން ސައިޓޮކްރޯމް އޮކްސިޑޭޝަން އެސޭއެއް ހެދީ ޔުބިކުއިންއޯން 2 (UQ2) (ގުދުރަތީ ޔޫކިޔު10 ގެ އެނަލޮގް އެއް ކަމަށްވާ ކުރު އައިސޯޕްރީން ޓޭލް) ގެ މައްޗަށް (ފޮޓޯ 2އީ) އެވެ. ކިލެޓެޑް ކުއިންއޯން ހުރުމުން ފާޅުވާ މައިކަލިސް ކޮންސްޓަންޓް ޞަރީޙަކޮށް ކަނޑައެޅުމަށް ހުރަސްއެޅި ނަމަވެސް (RC-LH114-W އަދި RC-LH116 އަކީ 0.2±0.1μM އަދި 0.5±0.2μM އަށް އެކަށީގެންވާ އެއްޗެހި) RC-LH114-W ( 4.6±0.2 e-RC-1 s-1) ގެ އެންމެ މަތީ ރޭޓަކީއެވެ RC-LH116 (3.6±0.1 e-RC-1 s-1) އަށްވުރެ %28±5 ބޮޑުވެއެވެ.
އަޅުގަނޑުމެން ފުރަތަމަ ލަފާކުރި ގޮތުގައި ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ހުންނަނީ ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސްގެ ގާތްގަނޑަކަށް %10 ގައި (16)؛ މިތަނުގައި ލޯ-ލައިޓް، މީޑިއަމް-ލައިޓް، އަދި ހައި-ލައިޓް ގްރޯތް ސެލްތަކުގެ އޮކިއުޕެންސީ ރޭޓް %15±0.6، %11±1 އަދި 0.9±0.5 އަށް އަރައެވެ (ފޮޓޯ 2އެފް). މާސް ސްޕެކްޓްރޯމެޓްރީގެ ކުއަންޓިޓޭޓިވް ކޮމްޕެރިޝަން އިން ދައްކާ ގޮތުގައި ހިސްޓިޑައިން ޓެގް އިތުރުކުރުމުން ވައިލްޑް ޓައިޕް ސްޓްރޭންސް އާއި އަޅާބަލާއިރު ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ގެ ނިސްބަތުން ގިނަކަން ދަށް ނުވާތީ (P = 0.59) މި މިންވަރުތަކަކީ މޮޑިފައިޑް ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ގެ އާޓިފެކްޓެއް ނޫނެވެ (ފޮޓޯ S10). ނަމަވެސް އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސްގައި ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއުގެ މި ދަށް އޮކިއުޕެންސީގެ ސަބަބުން ބައެއް އާރްސީތައް އަވަސް ރޭޓެއްގައި ފްލިޕް ވެދާނެ ކަމަށާއި، މިކަމުގެ ސަބަބުން އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ކޮމްޕްލެކްސްގައި ކިނޯން/ކުއިންލޯން ބަދަލުވުން މަޑުޖެހިދާނެ ކަމަށް ބެލެވެއެވެ. އަޅުގަނޑުމެންނަށް ފާހަގަކުރެވުނު ގޮތުގައި އަލި ގިނަވުމުގެ ނިސްބަތަކީ ފަހުގެ ޓްރާންސްކްރިޕްޓޮމިކްސް ޑޭޓާއާ އެއްގޮތް ނުވާ ކަމެއް ކަމަށާއި، މިއީ ވަރުގަދަ އަލިކަމުގެ ދަށުން ޕަފްޑަބްލިއު ޖީން އެކްސްޕްރެޝަން އިތުރުވާ ކަމެއް ކަމަށް ދައްކައެވެ (ފޮޓޯ S11) (23). ޕަފްޑަބްލިއު ޓްރާންސްކްރިޕްޝަން އާއި ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސް އަށް ވައްދައިގެން އުޅޭ ތަފާތަކީ އޮޅުން ބޮޅުން ބޮޑު އަދި ޕްރޮޓީންގެ ކޮމްޕްލެކްސް ރެގިއުލޭޝަން ދައްކުވައިދޭ ތަފާތެކެވެ.
RC-LH114-W ގައި 6 ކާޑިއޯލިޕިން (CDL)، 7 ފޮސްފަޓިޑައިލްކޮލިން (POPC)، 1 ފޮސްފަޓިޑައިލްގްލިސެރޯލް (POPG) އަދި 29 β-DDM މޮލިކިއުލް އެލޮކޭޓްކޮށް، އޭގައި 6 CDL، 24 POPC، 2 POPG އަދި 12 βDDM މޮލިކިއުލް ކުރެވިފައިވެއެވެ. RC-LH116 (ފޮޓޯ 5، އޭ އަދި ބީ) އެވެ. މި ދެ ސްޓްރަކްޗަރގައި ސީޑީއެލް ގާތްގަނޑަކަށް ހުންނަނީ ކޮމްޕްލެކްސްގެ ސައިޓޯޕްލާސްމިކް ފަރާތުގައި ކަމަށާއި، ޕީއޯޕީސީ، ޕީއޯޕީޖީ އަދި β-ޑީޑީއެމް ގިނައިން ހުންނަނީ ލޫމިނަލް ފަރާތުގައެވެ. RC-LH114-W ކޮމްޕްލެކްސްގެ αβ-1 އިން αβ-6 އަށް ދެ ލިޕިޑް އަދި ޑިޓާޖެންޓް މޮލިކިއުލް އެކަހެރިކޮށްފައިވާއިރު (ފޮޓޯ 5A)، ފަސް މޮލިކިއުލް އެކަހެރިކޮށްފައިވަނީ RC-LH116 ގެ އިކުއިވެންޓް ސަރަހައްދުގައި (ފޮޓޯ 5ބީ) އެވެ. ކޮމްޕްލެކްސްގެ އަނެއް ފަރާތުގައި މައިގަނޑު ގޮތެއްގައި ސީޑީއެލް އިން އާރްސީ އާއި αβ-7 އިން ފެށިގެން αβ-13 އަށް ޖަމާވެފައިވާ އިތުރު ލިޕިޑްސް ފެނިފައިވެއެވެ ( ފޮޓޯ 5، އޭ އަދި ބީ ). ސްޓްރަކްޗަރަލް ގޮތުން ރިޒޮލިއުޓް ވެފައިވާ އެހެން ލިޕިޑްތަކާއި ޑިޓާޖެންޓްތައް ހުންނަނީ LH1 ރިންގުގެ ބޭރުގައި ކަމަށާއި، ރަނގަޅަށް ރިޒޮލިއުޓް ވެފައިވާ އެސިލް ޗޭންތައް LH1 ސަބްޔުނިޓްތަކުގެ މެދުގައި ދިގުވެފައި ހުންނައިރު، ޓެންޓޭޓިވްކޮށް RC-LH114-W ގައި β-DDM ގެ ގޮތުގައި ކަނޑައެޅިފައިވާއިރު، β-DDM އަދި POPC-LH116 ގެ މިކްސްޗަރެއްގައި β-DDM ގެ ގޮތުގައި މާނަކޮށްފައިވެއެވެ. އަޅުގަނޑުމެންގެ ސްޓްރަކްޗަރގައި ކިލެޓިންގ ލިޕިޑްސް އާއި ޑިޓަރޖެންޓްސް ގެ އެއްގޮތް މަޤާމުތަކުން ދޭހަވަނީ އެއީ ފިޒިއޮލޮޖިކަލީ ރިލެވަންޓް ބައިންޑިންގ ސައިޓްތަކެއް ކަމެވެ ( ފޮޓޯ S12A ). Tch ގައި ހުންނަ އެއްވަރުގެ މޮލިކިއުލްތަކުގެ މަޤާމުތަކުގައި ވެސް ރަނގަޅު ކޮންސިސްޓެންސީއެއް ހުރެއެވެ. ޖެންޓަލް އަދި ޓްރވް. ސްޓްރޭން 970 RC-LH1s (ފޮޓޯ S12، B އިން E) (9، 12) އަދި ލިޕިޑް ހެޑް ގްރޫޕްގެ ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑިންގ ރެސިޑިއުސް އިން ސިކުއެންސް އެލައިންމަންޓްގައި ފުދޭވަރަކަށް ރަނގަޅު ކޮންޒަރވޭޝަނެއް ފެނިފައިވެއެވެ (ފޮޓޯ S13)، މިއިން ދޭހަވަނީ RC (24) އަށް ބައިންޑްވާ ކޮންޒަރވްޑް ސީޑީއެލް، މި ސައިޓްތައް RC-LH1 ކޮމްޕްލެކްސްގައި ކޮންޒަރވޭޝަން ހުރެދާނެއެވެ.
(އޭ އަދި ބީ) RC-LH114-W (A) އަދި RC-LH116 (B) ޕެޕްޓައިޑްސް ދައްކުވައިދެނީ ކާޓޫންތަކުން، އަދި ޕިގްމެންޓްތައް ދައްކުވައިދެނީ ރޮޑްތަކުން، ފޮޓޯ 1 ގައިވާ ކުލަ ސްކީމް ބޭނުންކޮށްގެންނެވެ. އާރްސީ ކިއުއޭ އަދި ކިއުބީ ސައިޓްތަކަށް ބައުންޑް ޔޫކިއު ރީނދޫ ކުލައެއްގައި ހުންނައިރު އެކަހެރި ޔޫކިއު އަކީ ބްލޫ ކުލައެކެވެ. (ސީ އަދި ޑީ) (އޭ) އަދި (ބީ) އާއި އެއްގޮތް ވިސްނުންތަކެއް، ލިޕިޑްސް ދޫކޮށްލާފައި ހުރެއެވެ. (E to G) RC-LH116 އިން Q1(E)، Q2(F) އަދި Q3(G) ގެ ބޮޑުކޮށްފައިވާ މަންޒަރު، އެކަކު އަނެކަކަށް ނުފޫޒު ފޯރުވާ ސައިޑް ޗޭންތަކާއެކު. ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑްތައް ދައްކާފައިވަނީ ކަޅު ކުލައިގެ ޑޭޝް ލައިންތަކެއްގެ ގޮތުގައެވެ.
RC-LH116 ގައި ޗާޖް ވަކިކުރުމުގެ ޕްރޮސެސްގައި އިލެކްޓްރޯން ޓްރާންސްފާގައި ބައިވެރިވާ RC QA އަދި QB UQ ވެސް އެމީހުންގެ ބައިންޑިންގ ސައިޓްތަކުގައި ޑިކޮމްޕޯސް ވެއެވެ. ނަމަވެސް RC-LH114-W ގައި ކިއުބީ ކުއިންއޯން އަށް ހައްލެއް ލިބިފައި ނުވާތީ ތިރީގައި ތަފްސީލުކޮށް ވާހަކަ ދައްކާނަމެވެ. ކިއުއޭ އަދި ކިއުބީ ކުއިންއޯންސްގެ އިތުރުން، ކިލެޓްޑް ދެ ޔޫކިއު މޮލިކިއުލް (އާރްސީ އަދި އެލްއެޗް1 ރިންގްސް އާއި ދެމެދުގައި ހުންނަ) އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ސްޓްރަކްޗަރގައި ދޫކުރެވިފައިވަނީ އެމީހުންގެ ރަނގަޅަށް ރިޒޮލިއުޓްވެފައިވާ ހެޑް ގްރޫޕްތަކަށް ބަލައިގެން (ކިއު1 އަދި ކިއު2 ގައި ހުންނަ) އެވެ. ސަރަހައްދު). ފޮޓޯ 5ސީ). ކިއު1 އަށް ދެ އައިސޮޕްރީން ޔުނިޓް ޙަވާލުކޮށްފައިވާއިރު، ޑެންސިޓީ މެޕުން ކިއު2 ގެ ފުރިހަމަ 10 އައިސޮޕްރީން ޓޭލްސް ރިޒޮލިއުޓް ކުރެވެއެވެ. RC-LH116 ގެ ސްޓްރަކްޗަރގައި ތިން ކިލެޓެޑް ޔޫކިއު10 މޮލިކިއުލް (Q1 އިން Q3 އަށް، ފޮޓޯ 5D) ރިޒޮލިއުޓް ވެފައިވާއިރު، ހުރިހާ މޮލިކިއުލްތަކެއްގެ މުޅި ދޫނީގައި ސާފު ޑެންސިޓީއެއް ހުރެއެވެ (ފޮޓޯ 5، ޑީ އިން ޖީ). މި ދެ ސްޓްރަކްޗަރގައި ކިއު1 އަދި ކިއު2 ގެ ކުއިންއޯން ހެޑް ގްރޫޕްތަކުގެ މަޤާމުތަކުގައި މޮޅު އެއްގޮތްކަމެއް ހުރެއެވެ (ފޮޓޯ S12F)، އަދި އެމީހުން މުޢާމަލާތު ކުރަނީ ހަމައެކަނި އާރްސީ އާއިއެވެ. Q1 ހުންނަނީ RC-LH114-W ގެ W ގޭޕްގެ ވަދެވޭ ހިސާބުގައި (ފޮޓޯ 1G އަދި 5، C، D އަދި E)، އަދި Q2 ހުންނަނީ QB ބައިންޑިންގ ސައިޓް ކައިރީގައި (ފޮޓޯ 5، C، D) އަދި F) އެވެ. ކޮންޒަރވް ކުރެވިފައިވާ L-Trp143 އަދި L-Trp269 ރެސިޑިއުސް އަކީ Q1 އަދި Q2 އާއި ވަރަށް ގާތް އެއްޗެހި ކަމުން ޕޮޓެންޝަލް π-ސްޓޭކިންގ އިންޓަރެކްޝަންސް ލިބިދޭ އެއްޗެކެވެ ( ފޮޓޯ 5، E އަދި F، އަދި ފޮޓޯ S12 ). Q1 ގެ ޑިސްޓަލް އޮކްސިޖަން އާއި 3.0 Å ދުރުގައި ހުންނަ L-Gln88 އިން ވަރުގަދަ ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑެއް ލިބެއެވެ ( ފޮޓޯ 5E )؛ މި ރެސިޑިއު އެންމެ ދުރު ގުޅުން ފިޔަވައި ހުރިހާ އާރްސީތަކެއްގައި ވެސް ރައްކާތެރިވެފައި ހުރެއެވެ (ފޮޓޯ S13). L-Ser91 އަކީ އެހެން ގިނަ RC ތަކުގައި Thr ގެ ބަދަލުގައި ކޮންޒަރވޭޓިވް ގޮތެއްގައި ބަދަލުވެފައިވާ އެއްޗެއް ( ފޮޓޯ S13 ) ކަމަށާއި، Q1 ގެ މެތައިލް އޮކްސިޖަން އިން 3.8 އެންގްސްޓްރޮމްސް ހުންނަ އެއްޗެއް ކަމަށާއި، ބަލިކަށި ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑްތަކެއް ލިބިދާނެ ކަމަށް ވެސް ޑރ. Q3 ވަކި މުޢާމަލާތެއް ކުރާހެން ނުފެނުނު ނަމަވެސް، އާރްސީ-އެމް ސަބްޔުނިޓާއި އެލްއެޗް1-α ސަބްޔުނިޓް 5 އިން 6 އާއި ދެމެދުގައިވާ ހައިޑްރޯފޮބިކް ސަރަޙައްދުގައި ހުރެއެވެ ( ފޮޓޯ 5، ޑީ އަދި ޖީ ). ކިއު1، ކިއު2 އަދި ކިއު3 ނުވަތަ ކައިރީގައިވާ ކިލެޓް ކުއިންއޯންސް ވެސް ޓީޗް ގައި ރިޒޮލިއުޓް ކުރެވިފައިވެއެވެ. މަޑުމައިތިރި، ޓްރވް. ސްޓްރޭން 970 އަދި ބީއެލްސީ އެވެ. އައިރިސް ސްޓްރަކްޗަރ (9، 10، 12) އިން އިޝާރާތް ކުރަނީ އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސް ގައި ކޮންޒަރވްޑް އޮކްސިލިއަރީ ކިނޯން ބައިންޑިންގ ސައިޓަކަށް ( ފޮޓޯ S12G ). RC-LH116 ގައިވާ ފަސް ޑިކޮމްޕޯސްޑް ޔޫކިއު އަކީ ހައި ޕާފޯމަންސް ލިކުއިޑް ކްރޮމެޓޮގްރަފީ (HPLC) އިން ކަނޑައެޅިފައިވާ ކޮންމެ ކޮމްޕްލެކްސްގެ 5.8±0.7 އާ ރަނގަޅަށް އެއްބަސްވާ އެއްޗެއް ކަމަށާއި، RC-LH114-W ގައިވާ ތިން ޑިކޮމްޕޯސްޑް ޔޫކިއު އަށް ވުރެ ދަށް ކަމަށް ވެއެވެ.
ސޫޑޯ ސިމެޓްރިކް އެލް އަދި އެމް ޕޮލިޕެޕްޓައިޑްތަކުގައި ކޮންމެ ޕޮލިޕެޕްޓައިޑެއްގައި ފަސް ޓީއެމްއެޗް ހިމެނޭއިރު، އެއް ބީސީއެލް ޑައިމަރ، ދެ ބީސީއެޗްއެލް މޮނޮމާރ، ދެ ބެކްޓީރިއޯފޭޖް (ބީޕީއެޗް) މޮނޮމާރ، އަދި އެއް ނޮން- ހީމް އަޔަން އަދި އެއް ނުވަތަ ދެ ޔޫކިއު10 މޮލިކިއުލް އެއްކޮށްލާ ހެޓެރޯޑައިމަރ އެއް އުފެދެއެވެ. ޓާރމިނަލް ކީޓޯން ގްރޫޕްގައި ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑްތައް ހުރުމާއި، އެކަން އެނގޭ ގޮތުގައި އާރްޕީއެސް ގައި ޖަމާވުމުގެ ތެރެއިން، ކެރޮޓީނޮއިޑްތައް އެމް-ސަބްޔުނިޓްގައި ހިމެނޭއިރު، މިއަށް ކިޔަނީ ސިސް-3،4-ޑީހައިޑްރޯރޯޑޮޕިން އެވެ. ވައްތަރު (25). އާރްސީ-އެޗްގެ ބޭރު މެމްބަރޭން ޑޮމެއިން މެމްބަރޭންގައި ނަކަލުކޮށްފައިވަނީ އެއް ޓީއެމްއެޗް އިންނެވެ. ޖުމްލަ އާރްސީ ސްޓްރަކްޗަރ އަކީ ގުޅުންހުރި ބާވަތްތަކުގެ (އާރްބީއޭ ފަދަ) ތިން ސަބްޔުނިޓް އާރްސީ އާއި އެއްގޮތް އެއްޗެކެވެ. ސްފެރޮއިޑްސް (ޕީޑީބީ އައިޑީ: 3އައި4ޑީ) އެވެ. މި ސްޓްރަކްޗަރތަކުގެ ރިޒޮލިއުޝަން ރޭންޖްގެ ތެރޭގައި BChl އަދި BPh ގެ މެކްރޯސައިކަލްސް، ކެރޮޓީނޮއިޑް ބެކްބޯން އަދި ނޮން-ހީމް އަޔަން އޯވަލެޕް ވާއިރު، QA ސައިޓްގައި UQ10 ހެޑް ގްރޫޕް އަދި RC-LH116 ގައި QB quinone ވެސް ހުރެއެވެ (ފޮޓޯ S15).
ތަފާތު ކިއުބީ ސައިޓް އޮކިއުޕެންސީ ރޭޓްތަކެއް ހުންނަ ދެ އާރްސީ ސްޓްރަކްޗަރ ލިބުމަކީ ކިއުބީ ކުއިންއޯން ބައިންޑިންގ އާއި އެކު އަންނަ އެއްގޮތަކަށް އަންނަ ކޮންފޯމަޝަނަލް ބަދަލުތައް ބެލުމަށް އާ ފުރުސަތެކެވެ. އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ކޮމްޕްލެކްސްގައި ކިއުބީ ކުއިންއޯން ހުންނަނީ ފުރިހަމައަށް ބައުންޑް “ޕްރޮކްސިމަލް” ޕޮޒިޝަންގައި (26) ނަމަވެސް އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ވަކިވުމުގައި ކިއުބީ ކުއިންއޯން ނުހުރެއެވެ. އާރުސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ގައި ކިއުބީ ކުއިންނޯން ނެތް ކަމަށާއި، މިއީ ހައިރާންވާންޖެހޭ ކަމެއް ކަމުގައި ވާއިރު، މި ކޮމްޕްލެކްސް އެކްޓިވް ކަމުން، ސްޓްރަކްޗަރަލް ރިޒޮލިއުޝަންޑް ކިއުބީ ކުއިންއޯން އާއި އެކު އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ކޮމްޕްލެކްސް އަށް ވުރެ ބޮޑަށް އެކްޓިވް ވެފައި ވާތީ އެވެ. ދެ އެލްއެޗް1 ރިންގް ގާތްގަނޑަކަށް ހަ ކިނޯން ކިލެޓް ކުރި ނަމަވެސް، ފަސް ކިނޮން ސްޓްރަކްޗަރަލް ގޮތުން ރިޒޮލިއުޓް ވެފައި ހުންނަނީ ބަންދު އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ރިންގް ގައި ކަމަށާއި، އޯޕަން އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ރިންގް ގައި ސްޓްރަކްޗަރަލް ގޮތުން ލިމިޓް ވެފައި ހުންނަނީ އެންމެ ތިން އަނގޮޓި އެވެ. މި އިތުރުވެފައިވާ ސްޓްރަކްޗަރަލް ޑިސްއޯޑަރަކީ އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ކިއުބީ ސައިޓްތައް އަވަހަށް ބަދަލުވުމާއި، ކޮމްޕްލެކްސްގައި ކުއިންއޯން ކައިންޓިކްސް އަވަސްވުމާއި، އެލްއެޗް1 ލޫޕް ހުރަސްކުރުމުގެ ފުރުސަތު އިތުރުވުން ދައްކުވައިދޭ ކަމެއް ކަމަށް ވެދާނެއެވެ. އަޅުގަނޑުމެން ލަފާކުރާ ގޮތުގައި RC-LH114-W ގެ RC QB ސައިޓްގައި UQ ނެތުމަކީ މާ ކޮމްޕްލެކްސް އަދި މާ އެކްޓިވް ކޮމްޕްލެކްސްއެއްގެ ނަތީޖާއަކަށް ވެދާނެ ކަމަށާއި، UQ ޓާނަވަރ ގައި RC-LH114-W ގެ QB ސައިޓް ވަގުތުން ފްރީޒްވެފައިވާ ކަމަށެވެ.
ކިއުބީ ނެތި، އެއާއެކު އެލް-ފެ217 ޔޫކިއު10 ބައިންޑިންގ އާއި އެއްގޮތް ނުވާ މަޤާމަކަށް އެނބުރުމަކީ، ދޫނީގެ ފުރަތަމަ އައިސޮޕްރީން ޔުނިޓާ ސްޕޭޝަލް ކޮލިޝަން އެއް އުފެދިދާނެތީއެވެ (ފޮޓޯ 6އޭ). މީގެ އިތުރުން ފާހަގަކުރެވޭ މައިގަނޑު ކޮންފޯމަޝަނަލް ބަދަލުތައް ފާހަގަކުރެވޭ، ޚާއްޞަކޮށް ހެލިކްސް ޑީ (ޓީއެމްއެޗް ޑީ އާއި އީ އާއި ދެމެދުގައިވާ ލޫޕްގައި ހުންނަ ކުރު ހެލިކްސް) ގައި L-Phe217 ކިއުބީ ބައިންޑިންގ ޕޮކެޓަށް ބަދަލުވުމާއި L-Tyr223 އެނބުރުން (ފޮޓޯ 6A ) M-Asp45 ފްރޭމްވޯކާއި ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑް ފަޅާލައި ކިއުބީ ބައިންޑިންގ ސައިޓްގެ އެންޓްރެންސް ބަންދުކުރުމަށެވެ (ފޮޓޯ 6ބީ) އެވެ. ހެލިކްސް ޑީ ޕިވޮޓްސް އޭގެ ބިންގަލުގައި، L-Ser209 ގެ Cα 0.33Å ބަދަލުވާއިރު، L-Val221Cα 3.52Å ބަދަލުވެއެވެ. ދެ ސްޓްރަކްޗަރގައި ވެސް ސުޕަރއިމްޕޯޒް ކުރެވޭ ޓީއެމްއެޗް ޑީ އަދި އީ އަށް ފާހަގަކުރެވޭ ބަދަލެއް ނުފެނެއެވެ ( ފޮޓޯ 6އޭ ). އަޅުގަނޑުމެންނަށް އެނގިފައިވާ ގޮތުގައި މިއީ ގުދުރަތީ އާރްސީގައި ކިއުބީ ސައިޓް ބަންދުކުރާ ފުރަތަމަ ސްޓްރަކްޗަރ އެވެ. ފުރިހަމަ (ކިއުބީ-ބައުންޑް) ސްޓްރަކްޗަރ އާއި އަޅާކިޔާއިރު، ކުއިންއޯން މަދުވުމުގެ ކުރިން، ކުއިންއޯން އަށް ވަދެވޭތޯ ކޮންފޯރމަޝަނަލް ބަދަލެއް ގެންނަން ޖެހެއެވެ. L-Phe217 އެނބުރި ކުއިނޯން ހެޑް ގްރޫޕާއެކު π-ސްޓޭކިންގ އިންޓަރެކްޝަން އެއް އުފެދި، ހެލިކްސް ބޭރަށް ބަދަލުވެ، L-Gly222 ގެ ސްކެލެޓަން އާއި L-Tyr223 ގެ ސައިޑް ޗޭން އަށް ސްޓޭބަލް ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑް ސްޓްރަކްޗަރ އެއް އެކުލެވޭ ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑް ނެޓްވޯކެއް އުފެދެއެވެ ( ފޮޓޯ 6، އޭ އަދި ސީ ).
(އ) ހޮލޮގްރާމް (އެލް ޗޭން، އޮރެންޖް/އެމް ޗޭން، މެޖެންޓާ) އަދި އެޕޯ (ގްރޭ) ސްޓްރަކްޗަރގެ އޮވަރލެޕިންގ ކާޓޫން، އޭގައި މުހިއްމު ރެސިޑިއުސްތައް ރޮޑް ކަހަލަ ތަމްސީލެއްގެ ސިފައިގައި ދައްކާފައިވެއެވެ. ޔޫކިއު10 ތަމްސީލުކުރަނީ ރީނދޫ ކުލައިގެ ދަނޑިއަކުންނެވެ. ޑޮޓް ލައިން އިން ދައްކުވައިދެނީ މުޅި ސްޓްރަކްޗަރގައި އުފެދިފައިވާ ހައިޑްރޯޖަން ބޮންޑްތަކެވެ. (ބީ އަދި ސީ) އެޕޮލިޕޯޕްރޮޓީން އާއި މުޅި ރިންގް ސްޓްރަކްޗަރގެ ސަރަހައްދީ ތަމްސީލު، L-Phe217 ގެ ސައިޑް ޗޭން އޮކްސިޖަން ބްލޫ ކުލައިން އަދި L-Tyr223 ގެ ސައިޑް ޗޭން އޮކްސިޖަން ރަތްކުލައިން ފާހަގަކޮށްދެއެވެ. އެލް ސަބްޔުނިޓަކީ އޮރެންޖް ކުލައިގެ އެއްޗެކެވެ؛ އެމް އަދި އެޗް ސަބްޔުނިޓްތަކުގައި ކުލައެއް ނުހުރެއެވެ. (ޑީ އަދި އީ) އެޕޮލިޕޯޕްރޮޓީން (ޑީ) އަދި ހޯލް (އީ) އާރްސީ ކިއުބީ ސައިޓްސް [ކުލަ (އޭ) އިން] އަދި ތަރމޮފިލަސް ތަރމޮފިލަސް ޕީއެސްއައިއައި (ފެހި، ޕްލާސްޓިކް ކިނޯން އާއި އެކު ކަޅު؛ ޕީޑީބީ އައިޑީ: 3ޑަބްލިޔުޔޫ2) އެލައިން (58).
ހީވެސް ނުކުރާ ގޮތަކަށް، އެލްއެޗް1 ނެތް ކިއުބީ ނެތް އާރްސީތަކުގެ ބައެއް ސްޓްރަކްޗަރތައް ހުރި ނަމަވެސް، މި ދިރާސާއިން ފެނުނު ކޮންފޯމަޝަނަލް ބަދަލުތައް މީގެ ކުރިން ރިޕޯޓްކޮށްފައެއް ނުވެއެވެ. އޭގެ ތެރޭގައި ބީއެލްސީން ކިއުބީ ޑިޕްލީޝަން ސްޓްރަކްޗާ ހިމެނެ އެވެ. viridis (ޕީޑީބީ އައިޑީ: 3ޕީއާރުސީ) (27)، ޓްޗް. ޓެޕިޑަމް (ޕީޑީބީ އައިޑީ: 1އީވައިއެސް) (28) އަދި އާރްބީއޭ އެވެ. ސްފެރޮއިޑެސް (PDB ID: 1OGV) (29)، މި ހުރިހާ އެއްޗެއް ވެސް ހުންނަނީ އެމީހުންގެ ޖުމްލަ ކިއުބީ ސްޓްރަކްޗަރ އާއި ގާތްގަނޑަކަށް އެއްގޮތަށެވެ. 3ޕީއާރުސީ ގާތުން ބަލާލުމުން އެނގުނު ގޮތުގައި އެލްޑީއޭއޯ (ލޯރިލް ޑައިމެތައިލް އެމިން އޮކްސައިޑް) ޑިޓާޖެންޓް މޮލިކިއުލްތައް ކިއުބީ ޕޮޒިޝަންގެ އެންޓްރެންސްގައި ބައިންޑްވެ، ބަންދު ކޮންފޯމަޝަނަކަށް އަލުން ތަރުތީބުވުން ހުއްޓުވޭނެ އެވެ. 1އީވައިއެސް ނުވަތަ 1އޯޖީވީގައި އެއް މަގާމެއްގައި އެލްޑީއޭއޯ ޑިކޮމްޕޯސް ނުވި ނަމަވެސް، މި އާރްސީތައް ތައްޔާރުކުރަނީ އެއް ޑިޓާޖެންޓެއް ބޭނުންކޮށްގެން ކަމުން އެއް އަސަރެއް ކޮށްފާނެ އެވެ. އާރްބީއޭގެ ކްރިސްޓަލް ސްޓްރަކްޗަރ އެވެ. ސައިޓޮކްރޯމް ސީ2 (ޕީޑީބީ އައިޑީ: 1އެލް9ބީ) އާއި އެކު ކޯ ކްރިސްޓަލައިޒް ކޮށްފައިވާ ސްފެރޮއިޑެސް އާރްސީ ގައި ވެސް ބަންދު ކިއުބީ ސައިޓެއް ހުންނަހެން ހީވެއެވެ. ނަމަވެސް މި ހާލަތުގައި އާރްސީ-އެމް ޕޮލިޕެޕްޓައިޑްގެ އެން-ޓާރމިނަލް ރީޖަން (ކިއު ހެލިކްސްގައި ހުންނަ ޓައިރ ރެސިޑިއުގެ އެޗް ބޮންޑް މެދުވެރިކޮށް ކިއުބީ ބައިންޑިންގ ސައިޓާ މުޢާމަލާތްކުރާ) ގުދުރަތީ ނޫން ކޮންފޯމަޝަނެއް އުފެދި، ކިއުބީ ކޮންފޯރމަޝަނަލް ބަދަލު އިތުރަށް ދިރާސާ ނުކުރެވެއެވެ (30 ). ޔަގީންކަން ލިބޭ ކަމަކީ، އާރްސީ-އެލްއެޗް116 އާރްސީގެ އެން-ޓާރމިނަލް ރީޖަން އާއި ގާތްގަނޑަކަށް އެއްވަރުގެ އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ސްޓްރަކްޗަރގައި އެމް ޕޮލިޕެޕްޓައިޑްގެ މި ބާވަތުގެ ޑިފޯރމަޝަން އަޅުގަނޑުމެންނަށް ފެނިފައި ނުވާކަމެވެ. އަދި ޑިޓާޖެންޓް އަށް ބިނާކޮށްފައިވާ އެލްއެޗް1 އެންޓެނާ ނައްތާލުމަށްފަހު ޕީޑީބީގައި ހުންނަ އެޕޮލިޕޯޕްރޮޓީން އާރްސީތައް ރަނގަޅުވެ، އާރްސީ އާއި ވަށައިގެންވާ އެލްއެޗް1 ރިންގްގެ އެތެރޭގެ ފަރަގުގައި ހުންނަ އެތެރޭގެ ކުއިންއޯން ޕޫލްތަކާއި ލިޕިޑްސް ނައްތާލެވިފައިވާކަން ފާހަގަކޮށްލެވެއެވެ (31، 32). އާރްސީ ފަންކްޝަނަލް ވެފައި އޮންނަނީ ޑިކޮމްޕޯޒެބަލް ކިއުބީ ކުއިންއޯން ފިޔަވައި ހުރިހާ ކޯފެކްޓަރސް އެއް ހިފަހައްޓާތީއެވެ (33). މީގެ އިތުރުން އާރްސީ އިން އެލްއެޗް1 އަދި ގުދުރަތީ ސައިކްލިކް ލިޕިޑްސް ނައްތާލުމުން ޗާޖުން ވަކިވެފައިވާ ޕީ+ކިއުބީ-ސްޓޭޓްގެ އުމުރު ކުރުވުން ފަދަ ފަންކްޝަންތަކަށް އަސަރު ފޯރާފާނެކަން އެނގެއެވެ (31، 34، 35). އެހެންކަމުން އަޅުގަނޑުމެން ލަފާކުރާ ގޮތުގައި އާރްސީ ވަށައިގެން ލޯކަލް އެލްއެޗް1 ރިންގް ހުރުމުން “ބަންދު” ކިއުބީ ސައިޓް ދެމެހެއްޓިދާނެ ކަމަށާއި، އެކަމުގެ ސަބަބުން ކިއުބީ ކައިރީގައިވާ ލޯކަލް މާހައުލު ރައްކާތެރިވެދާނެ ކަމަށެވެ.
އެޕޮލިޕޯޕްރޮޓީން (ކިއުބީ ކުއިންއޯން ނެތި) އާއި ފުރިހަމަ ސްޓްރަކްޗަރ ތަމްސީލުކުރަނީ ކިއުބީ ސައިޓްގެ ޓާނަވަރގެ އެންމެ ދެ ސްނެޕްޝޮޓެއް ނަމަވެސް، ސިލްސިލާ ހާދިސާތަކެއްގެ ބަދަލުގައި، ހައިޑްރޯކުއިންއޯން އިން ރީބައިންޑް ނުވުމަށް ބައިންޑިންގ ގޭޓް ކުރެވިދާނެ ކަމުގެ އިޝާރާތްތައް އެބަހުއްޓެވެ. އެޕޮލިޕޯޕްރޮޓީންގެ ކިއުބީ ސައިޓް ކައިރީގައި ކިނޮލޯލް އާއި ކިނޯން ގެ މުއާމަލާތް ތަފާތުވެދާނެ ކަމަށާއި، މިއީ އާރްސީ އިން އެކަން ރިޖެކްޓް ވުމަށް މެދުވެރިވާ ސަބަބެކެވެ. ކޮންފޯމަޝަނަލް ބަދަލުތަކުގެ ދައުރެއް ކުއިންއޯންސް ބައިންޑް ވުމާއި ރިޑަކްޝަން ކުރުމުގައި ގިނަ ދުވަސްތަކެއް ވަންދެން ހުށަހަޅާފައިވެއެވެ. އަނދިރި އެޑެޕްޓޭޝަނަށްފަހު ފްރޯޒެން އާރްސީތަކުގެ ކިނޯންސް މަދުކުރުމުގެ ޤާބިލުކަން ދަށްވެއެވެ (36)؛ އެކްސްރޭ ކްރިސްޓަލޮގްރަފީ އިން ދައްކާ ގޮތުގައި މި ގެއްލުން ލިބެނީ އެކްޓިވް ޕްރޮކްސިމަލް ޕޮޒިޝަން އިން ގާތްގަނޑަކަށް 4.5 Å ދުރުގައި “ޑިސްޓަލް” ކޮންފޯމޭޝަނެއްގައި ކިއުބީ ކުއިންއޯންސް ތާށިވެފައި ހުރުމުންނެވެ (26) , 37). އަޅުގަނޑުމެން ލަފާކުރާ ގޮތުގައި މި ޑިސްޓަލް ބައިންޑިންގ ކޮންފޯމަޝަން އަކީ އެޕޮލިޕޯޕްރޮޓީން އާއި ފުލް ރިންގް ސްޓްރަކްޗަރ އާއި ދެމެދުގައިވާ އިންޓަރމިޑިއަޓް ސްޓޭޓްގެ ސްނެޕްޝޮޓެއް ކަމަށާއި، މިއީ ކިނޯން އާއި އެކު ފުރަތަމަ މުއާމަލާތް ކުރުމާއި ކިއުބީ ސައިޓް ހުޅުވުމާ ގުޅިގެން ކުރާ ކަމެއް ކަމަށެވެ.
ވަކި ފޮޓޯޓްރޮފިކް ބެކްޓީރިއާތަކާއި ސައިނޯބެކްޓީރިއާ، އަލްގޭ އަދި ގަސްގަހާގެހި ޕީއެސްއައިއައި ކޮމްޕްލެކްސް އިން ފެންނަ ޓައިޕް II އާރްސީ އަކީ ސްޓްރަކްޗަރަލް އަދި ފަންކްޝަނަލް ކޮންޒަރވޭޝަން އެއް ލިބިފައިވާ އެއްޗެކެވެ (38). ފޮޓޯ 6 (ޑީ އަދި އީ) ގައިވާ ސްޓްރަކްޗަރަލް އެލައިންމަންޓުން ބާރުއަޅަނީ ޕީއެސްއައިއައި އާރްސީތަކާއި ބެކްޓީރިއަލް އާރްސީ ކޮމްޕްލެކްސްގެ ކިއުބީ ސައިޓް އާއި އެއްގޮތްކަމެވެ. މި އަޅާކިޔުމަކީ ގިނަ ދުވަސްތަކެއް ވަންދެން ކިނޯން ބައިންޑް ކުރުމާއި ރިޑަކްޝަންގެ ގާތް ގުޅުން ހުރި ނިޒާމުތައް ދިރާސާކުރުމަށް މޮޑެލްއެކެވެ. މީގެ ކުރިން ނެރުނު ޕަބްލިކޭޝަންތަކުން ދައްކާގޮތުގައި ކޮންފޯމަޝަނަލް ބަދަލުތަކާއި އެކު ޕީއެސްއައިއައި ރިޑަކްޝަން އޮފް ކިނޯންސް (39، 40) ވެއެވެ. އެހެންކަމުން އާރްސީގެ އިވޮލިއުޝަނަރީ ކޮންޒަރވޭޝަނަށް ބަލާއިރު، ކުރިން ނުފެންނަ މި ބައިންޑިންގ މެކޭނިޒަމް އޮކްސިޖަން އެކުލެވޭ ފޮޓޯޓްރޮފިކް ގަސްގަހުގައި ޕީއެސްއައިއައި އާރްސީގެ ކިއުބީ ސައިޓަށް ވެސް އަމަލުކުރެވިދާނެއެވެ.
Rps ΔpufW (އަންލޭބަލްޑް pufW ޑިލީޝަން) އަދި PufW-His (C-terminal 10x His-tagged protein-W އެކްސްޕްރެސްޑް ފްރޮމް ދަ ނެޗުރަލް ޕަފްޑަބްލިއު ލޮކަސް) ސްޓްރޭންސް އެވެ. palustris CGA009 އަޅުގަނޑުމެންގެ ކުރީގެ މަސައްކަތުގައި ބަޔާންކޮށްފައިވެއެވެ (16). މި ސްޓްރޭންސްތަކާއި އައިސޯޖެނިކް ވައިލްޑް ޓައިޕް ޕޭރެންޓް ފްރީޒާއިން ހޯދާފައިވަނީ ޕީއައިއީ (ކޮންމެ 5 ގްރާމް ލީޓަރ -1) (އެލްބީގައި -80 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި ރައްކާކޮށްފައި، %50 ( w/v) ގްލިސެރޯލް) ޕްރޮޓީން، ޔީސްޓް އެކްސްޓްރެކްޓް އަދި ސުކްސިނެޓް ހިމެނޭ) އަގަރ [1.5% (w/v)] ޕްލޭޓްގައި މަދު އަދަދެއްގެ ސެލްތައް ސްޓްރީކްކޮށްގެންނެވެ. އެނަރޮބިކް ޝަރުޠުތަކުގައި ކޮޓަރީގެ ފިނިހޫނުމިނުގައި އަނދިރީގައި އެއްރޭ ވަންދެން ޕްލޭޓް އިންކިއުބޭޓްކޮށް، އޭގެ ފަހުން އެއް ކޮލޮނީއެއް ފެންނަންދެން އޮއެސްރަމް 116-ޑަބްލިއު ހެލޯޖަން ބަލްބްސް (އާރުއެސް ކޮމްޕޮނެންޓްސް، ޔޫކޭ) އިން ފޯރުކޮށްދޭ ހުދު އަލިން (~50 μmolm-2 s-1) 3 ދުވަހުން 5 ދުވަހަށް އަލިކޮށްފައިވެއެވެ. އެއް ކޮލޮނީއެއް ބޭނުންކޮށްގެން %0.1 (w/v) ކެސަމިނޯ އެސިޑް (މިހާރު ކިޔާނީ M22) ސަޕްލިމެންޓްކޮށްފައިވާ 10 މިލިލީޓަރުގެ M22+ މީޑިއަމް (41) އިންއޮކިއުލޭޓް ކުރިއެވެ. މި ކަލްޗަރ 34 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި އަނދިރީގައި އޮކްސިޖަން މަދު ހާލަތެއްގައި 180 rpm ގައި 48 ގަޑިއިރު ވަންދެން ތެޅިގަނެ، އޭގެ ފަހުން 70 މިލިލީޓަރުގެ ކަލްޗަރ އެއް ޝަރުތުތަކެއްގައި 24 ގަޑިއިރު އިންއޮކިއުލޭޓް ކުރިއެވެ. 1 މިލިލީޓަރުގެ ވޮލިއުމްގެ ސެމީ އެރޮބިކް ކަލްޗަރ ބޭނުންކޮށްގެން 30 މިލިލީޓަރުގެ ޔުނިވާސަލް ސްކްރޫ ޓޮޕް ޓްރާންސްޕޭރެންޓް ބިއްލޫރި ފުޅިއެއްގައި 30 މިލިލީޓަރުގެ އެމް22 މީޑިއަމް އިންއޮކިއުލޭޓްކޮށް، ސްޓިރިލް މެގްނެޓިކް ފޯސް ސްޓިރިންގ ރޮޑް އިން 48 ގަޑިއިރު ވަންދެން އެޖިޓޭޝަން (~50μmolm-2 s-1) އިން އިރެޑިއޭޓް ކުރެއެވެ. ދެން 30 މިލިލީޓަރުގެ ކަލްޗަރ ގާތްގަނޑަކަށް 1 ލީޓަރުގެ ކަލްޗަރ އިން ހަމަ އެ ޝަރުޠުތަކުގައި އިންއޮކިއުލޭޓް ކުރިއިރު، އެ ކަލްޗަރ ބޭނުންކޮށްގެން ~200 μmolm-2 s-1 ގައި 72 ގަޑިއިރު ވަންދެން އަލިކޮށްފައިވާ ގާތްގަނޑަކަށް 9 ލީޓަރުގެ ކަލްޗަރ އިންއޮކިއުލޭޓް ކުރިއެވެ. މި ސެލްތައް 7132 RCF ގައި 30 މިނެޓް ވަންދެން ސެންޓްރިފިގޭޝަން މެދުވެރިކޮށް ހޯދައި، ~10 ml 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ގައި އަލުން ސަސްޕެންޑްކޮށް، ބޭނުންވާ ވަރަށް -20 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި ރައްކާކޮށްފައިވެއެވެ.
ތެމިލުމަށްފަހު ރީސަސްޕެންޑް ކުރެވިފައިވާ ސެލްތަކަށް ޑިއޮކްސީރައިބޮނިއުކްލިއޭޒް އައި (މަރކް، ޔޫކޭ)، ލައިސޯޒައިމް (މަރކް، ޔޫކޭ) އަދި ރޯޝް ހޯލޯއެންޒައިމް ޕްރޮޓީއޭޒް އިންހިބިޓަރ ޓެބްލެޓް (މެރކް، ޔޫކޭ) ގެ ބައެއް ކްރިސްޓަލްތައް އަޅާށެވެ. 20،000 ޕީއެސްއައި ފްރެންޗް ޕްރެޝަރ ސެލް (އެމިންކޯ، އެމެރިކާ) ގައި 8 އާއި 12 ފަހަރު ސެލްތައް ޑިސްޓްރަޕްޓް ކޮށްފައިވެއެވެ. 4 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި 18،500 އާރުސީއެފްގައި 15 މިނެޓް ވަންދެން ސެންޓްރިފިގޭޝަން ކޮށްގެން ފަޅައިގެން ނުދާ ސެލްތަކާއި ނުހިމެނޭ ކުނިތައް ނައްތާލުމަށްފަހު، 43،000 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި 113،000 އާރުސީއެފްގައި 2 ގަޑިއިރު ސެންޓްރިފިގޭޓްކޮށްގެން ޕިގްމެންޓް ކޮށްފައިވާ ލައިސޭޓް އިން މެމްބަރޭން ޕްރެސިޕިޓޭޓް ކުރިއެވެ. ސޮލިއުބަލް ފްރެކްޝަން އުކާލުމަށްފަހު ކުލަ ޖަހާފައިވާ މެމްބަރޭން 100 އާއި 200 މިލިލީޓަރުގެ 20 އެމްއެމް ޓްރިސް-އެޗްސީއެލް (ޕީއެޗް 8.0) ގައި އަލުން ސަސްޕެންޑްކޮށް، ފެންނަ އެގްރިގޭޓްތައް ނުފެންނަންދެން ހޯމޯޖެނައިޒް ކޮށްލާށެވެ. ސަސްޕެންޑް ކޮށްފައިވާ މެމްބަރޭން %2 (w/v) β-DDM ހިމެނޭ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) (Anatrace, USA) ގައި 4 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި އަނދިރީގައި 1 ގަޑިއިރު މަޑުމަޑުން ހޫނުކޮށްގެން އިންކިއުބޭޓް ކުރިއެވެ. ދެން 70 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި 150،000 އާރްސީއެފް 4 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި 1 ގަޑިއިރު ވަންދެން ސެންޓްރިފިއުޖްކޮށްގެން ބާކީ ހުރި އިންސޮލޫބަލްސް ނައްތާލާށެވެ.
ΔpufW ސްޓްރޭން އިން ލިބުނު ސޮލިބިލައިޒިންގ މެމްބަރޭން 50 މިލިލީޓަރުގެ ޑީއީއޭއީ ސެފަރޯޒް އަޔަން އެކްސްޗޭންޖް ކޮލަމް އެއްގައި ތިން ކޮލަމް ވޮލިއުމް (CV) ގެ ބައިންޑިންގ ބަފަރ [20 mM tris-HCl (pH 8.0) ގައި %0.03 (w / v) β-DDM ހިމެނޭ ގޮތަށް އުނގުޅާފައިވެއެވެ. ދެ ސީވީ ބައިންޑިންގ ބަފަރ އިން ކޮލަމް ދޮވެ، ދެން 50 mM NaCl ހިމެނޭ ދެ ބައިންޑިންގ ބަފަރ އިން ކޮލަމް ދޮވެލާށެވެ. RC-LH116 ކޮމްޕްލެކްސް 1.75 ސީވީގައި 150 އާއި 300 އެމްއެމް NaCl (ބައިންޑިންގ ބަފަރގައި) ގެ ލައިނަރ ގްރޭޑިއަންޓެއްގައި އެލިއުޓްކޮށް، ބާކީ ހުރި ބައިންޑިންގ ކޮމްޕްލެކްސް 0.5 CV ގައި 300 mM NaCl ހިމެނޭ ބައިންޑިންގ ބަފަރަކުން އެލިއުޓް ކުރިއެވެ. އެބްޒޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރަމް 250 އާއި 1000 ނޯޓް މީޓަރާއި ދެމެދުގެ މިންވަރަކަށް އެއްކޮށް، އެބްޒޯރބަންސް ރޭޝިއޯ (A880/A280) 1 އަށްވުރެ ބޮޑު ފްރެކްޝަން 880 އާއި 280 ނޯޓް މީޓަރުގައި ބަހައްޓައި، ބައިންޑިންގ ބަފަރުގައި ދެފަހަރު ޑައިލޫޓްކޮށް، ޑީއީއޭއީ ކޮލަމްގައި އަލުން ހަމަ މި އުސޫލު ބޭނުންކުރުން On purification. 1.7 އަށްވުރެ މަތީ A880/A280 ރޭޝިއޯ އަދި 3.0 އަށްވުރެ މަތީ A880/A805 ރޭޝިއޯ ހުންނަ ފްރެކްޝަންތައް ޑައިލޫޓްކޮށް، އަޔަން އެކްސްޗޭންޖްގެ ތިންވަނަ ބުރު ކުރިއަށް ގެންގޮސް، 2.2 އަށްވުރެ މަތީ A880/A280 ރޭޝިއޯ އަދި 5.0 އަށްވުރެ މަތީ A880/A805 ރޭޝިއޯ ހުންނަ ފްރެކްޝަންތައް ހިފެހެއްޓުން. ޕާރޝިއަލީ ޕިއުރިފައިޑް ކޮމްޕްލެކްސް އެމިކޮން 100،000 މޮލިކިއުލަރ ވެއިޓް ކަޓް-އޮފް (MWCO) ސެންޓްރިފިއުގަލް ފިލްޓަރ (Merck, UK) ގައި ~2 މިލިލީޓަރަށް ކޮންސެންޓްރޭޓްކޮށް، 200 mM NaCl ބަފަރ ހިމެނޭ ސުޕަރޑެކްސް 200 16/600 ސައިޒް އެކްސްކްލޫޝަން ކޮލަމް (GE Healthcare, US) އަށް ލޯޑްކޮށް، ހަމަ އެ ބަފަރުގައި 1.5 CV ގައި އެލިއުޓް ކުރިއެވެ. ސައިޒް އެކްސްކްލޫޝަން ފްރެކްޝަންގެ އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރާ އެއްކޮށް، 2.4 އަށް ވުރެ މަތީގައި A880/A280 ރޭޝިއޯ އަދި 5.8 އިން 100 A880 އަށް ވުރެ މަތީގެ A880/A805 ރޭޝިއޯތަކާއެކު އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރާ ކޮންސެންޓްރޭޓްކޮށް، ވަގުތުން ކްރައިއޯ-ޓީއީއެމް ގްރިޑް ތައްޔާރުކުރުމަށް ނުވަތަ ރައްކާކުރުމަށް ބޭނުންކުރުން ބޭނުންވާ ވަރަށް -80 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި ބަހައްޓާށެވެ.
ޕަފްޑަބްލިޔު-ހިސް ސްޓްރޭން އިން ސޮލިބިލައިޒިންގ މެމްބަރޭން އައިއެމްއޭސީ ބަފަރ ( ޖީއީ ހެލްތްކެއާ) ގައި 20 މިލިލީޓަރުގެ ހިސްޕްރެޕް އެފްއެފް ނައި-އެންޓީއޭ ސެފަރޯޒް ކޮލަމް (200 އެމްއެމް ޓްރިސް-އެޗްސީއެލް (ޕީއެޗް 8.0)) އަށް އުނގުޅާފައިވެއެވެ. v) β-ޑީޑީއެމް]. މި ކޮލަމް ދޮވެފައިވަނީ އައިއެމްއޭސީ ބަފަރުގެ ފަސް ސީވީ އިން، އަދި އޭގެ ފަހުން 10 އެމްއެމް ހިސްޓިޑައިން ހިމެނޭ އައިއެމްއޭސީ ބަފަރުގެ ފަސް ސީވީ އިންނެވެ. ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސް ކޮލަމް އިން އެލިއުޓް ކޮށްފައިވަނީ 100 އެމްއެމް ހިސްޓިޑައިން ހިމެނޭ ފަސް އައިއެމްއޭސީ ބަފަރ އިންނެވެ. RC-LH114-W ކޮމްޕްލެކްސް ހިމެނޭ ފްރެކްޝަން ~10 މިލިލީޓަރަށް އެމިކޮން 100،000 އެމްޑަބްލިއުސީއޯ ފިލްޓަރ (Merck, UK) ޖަހާފައިވާ ހޫނުކޮށްފައިވާ ޓޭންކެއްގައި ކޮންސެންޓްރޭޓްކޮށް، ބައިންޑިންގ ބަފަރ އިން 20 ފަހަރު ޑައިލޫޓްކޮށް، އޭގެ ފަހުން 25 މިލިލީޓަރަށް އިތުރުކޮށް ޑީއީއޭއީ ސެފަރޯސް ކޮލަމްގައި ކުރިން ބޭނުންކުރެއެވެ. ހަތަރު ސީވީ ބައިންޑިންގ ބަފަރ އިން ކޮލަމް ދޮވެ، ދެން 0 އާއި 100 އެމްއެމް NaCl އާއި ދެމެދުގެ ލައިނަރ ގްރޭޑިއަންޓެއްގައި އަށް ސީވީ އެއްގައި ކޮމްޕްލެކްސް އެލިއުޓްކޮށް (ބައިންޑިންގ ބަފަރ ގައި)، އަދި ބާކީ 100 mM ބައިންޑިންގ ބަފަރ ހިމެނޭ ބާކީ ހަތަރު ސީވީ ސޯޑިއަމް ކްލޮރައިޑް ގައި އެލިއުޓް ކުރެވުނު ރެޒިޑިއުއަލް ކޮމްޕްލެކްސްތައް 2.4 އަށްވުރެ މަތީގެ A880/A280 ރޭޝިއޯ އާއި ގުޅިގެން 4.6 ފްރެކްޝަނަށްވުރެ މަތީގެ A880/A805 ރޭޝިއޯ އެމިކޮން 100،000 މެގަވޮޓްސީއޯ ސެންޓްރިފިއުގަލް ފިލްޓަރެއްގައި ~2 މިލިލީޓަރަށް ކޮންސެންޓްރޭޓްކޮށް، ކުރިން 1.5 ސީވީ އައިއެމްއޭސީ ފުރައި، ބަފަރ އިކުއިލިބްރޭޓެޑް ސުޕަރޑެކްސް 200 16/600 ސައިޒް އެކްސްކްލޫޝަން ކޮލަމްގައި، ދެން ހަމަ އެ ބަފަރުގައި 1.5 ސީވީގައި އެލިއުޓް ކުރިއެވެ. ސައިޒް-އެކްސްކްލޫޝަން ފްރެކްޝަންތަކުގެ އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރާ އެއްކޮށް، 2.1 އަށް ވުރެ މަތީގެ A880/A280 ރޭޝިއޯތަކާއި 4.6 އިން 100 A880 އަށް ވުރެ މަތީގެ A880/A805 ރޭޝިއޯތަކާއެކު އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރާ ކޮންސެންޓްރޭޓްކޮށް، ވަގުތުން ފްރޯޒެން ޓީއީއެމް ގްރިޑް ތައްޔާރުކުރުމަށް ބޭނުންކުރުން ނުވަތަ ބޭނުންވާ ވަރަށް -80 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި ރައްކާކުރުން.
ލޯ ޓެމްޕަރޭޗަރ ޓީއީއެމް ގްރިޑްތައް ތައްޔާރުކުރުމަށް ލޭއިކާ އީއެމް ޖީޕީ އިމަރޖެންސް ފްރީޒާއެއް ބޭނުންކޮށްފައިވެއެވެ. މި ކޮމްޕްލެކްސް އައިއެމްއޭސީ ބަފަރުގައި 50 ގެ A880 އަށް ޑައިލޫޓްކޮށް، އޭގެ ފަހުން 5μl އަލަށް ގްލޯ ޑިސްޗާޖް ކުރެވުނު QUANTIFOIL 1.2/1.3 ކާބަން ކޯޓް ކޮށްފައިވާ ކޮޕަރ މެޝް (Agar Scientific, UK) އަށް ލޯޑް ކުރިއެވެ. ގްރިޑް 20 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސް އަދި %60 ރިލޭޓިވް ހޫޑިޑިޓީގައި 30 s އިންކިއުބޭޓްކޮށް، ދެން 3 s ވަންދެން ބްލޮޓްކޮށް ހިއްކައި، -176 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި ލިކުއިޑް އީތޭންގައި ނިއްވާލާށެވެ.
RC-LH114-W ކޮމްޕްލެކްސްގެ ޑޭޓާ އީބީއައިސީ (އިލެކްޓްރޯނިކް ބަޔޯއިމޭޖިންގ ސެންޓަރ) (ބްރިޓިޝް ޑައިމަންޑް ލައިޓް ސޯސް) ގައި ރެކޯޑްކޮށްފައިވަނީ 300kV ގެ އެކްސެލެރޭޓިންގ ވޯލްޓޭޖްގައި މަސައްކަތްކުރާ ޓައިޓަން ކްރިއޯސް މައިކްރޯސްކޯޕަކުން ކަމަށާއި، މިއީ 130،000× ގެ ނޮމިނަލް މެގްނިފިކޭޝަން އަދި- 20 eV ގެ ގޭޕް ހޮވާށެވެ. ޑޭޓާ އެއްކުރުމަށް ކައުންޓިން މޯޑުގައި ތަސްވީރުތައް ރެކޯޑް ކުރުމަށް ކޭ2 ޕީކް ޑިޓެކްޓަރ އާއި އެކު ގަޓަން 968 ޖީއައިއެފް ކުއަންޓަމް ބޭނުންކުރި އެވެ. ކެލިބްރޭޓް ކުރެވިފައިވާ ޕިކްސެލް ސައިޒަކީ 1.048Å ކަމަށާއި، ޑޯޒް ރޭޓަކީ 3.83 e-Å-2s-1 ކަމަށް ވެސް ޑރ. 11 ސިކުންތުގެ ތެރޭގައި ފިލްމު އެއްކޮށް 40 ބަޔަކަށް ބަހާލިއެވެ. ކާބަން ކޯޓްކޮށްފައިވާ ސަރަހައްދު ބޭނުންކޮށްގެން މައިކްރޯސްކޯޕް އަލުން ފޯކަސްކޮށް، ދެން ކޮންމެ ލޯވަޅަކަށް ތިން ފިލްމު އެއްކޮށްލާށެވެ. ޖުމްލަ 3130 ފިލްމު އެއްކޮށްފައިވާއިރު، ޑިފޯކަސް ވެލިއުތައް ހުރީ -1 އާއި -3μm އާއި ދެމެދުގެ އަދަދަކަށެވެ.
އާރްސީ-އެލްއެޗް116 ކޮމްޕްލެކްސްގެ ޑޭޓާ އެއްކޮށްފައިވަނީ ހަމަ މި މައިކްރޯސްކޯޕް ބޭނުންކޮށްގެން އެސްޓަރބަރީ ބަޔޯސްޓްރަކްޗަރ ލެބޯޓްރީ (ޔުނިވަރސިޓީ އޮފް ލީޑްސް، ޔޫކޭ) އިންނެވެ. މި ޑޭޓާ އެއްކޮށްފައިވަނީ 130 ކޭ ގެ މެގްނިފިކޭޝަނަކާއެކު ކައުންޓިންގ މޯޑުގައި ކަމަށާއި، ޕިކްސެލް ސައިޒް 1.065 Å އަށް ކެލިބްރޭޓްކޮށްފައިވަނީ 4.6 e-Å-2s-1 ގެ ޑޯޒެއްގައި ކަމަށް ވެސް ޑރ. މި ފިލްމު 12 ސިކުންތުގެ ތެރޭގައި ރެކޯޑްކޮށް 48 ބަޔަށް ބަހާލާފައިވެ އެވެ. ޖުމްލަ 3359 ފިލްމު އެއްކޮށްފައިވާއިރު، ޑިފޯކަސް ވެލިއުތައް ހުރީ -1 އާއި -3μm އާއި ދެމެދުގެ އަދަދަކަށެވެ.
ހުރިހާ ޑޭޓާ ޕްރޮސެސިންގ އެއް ކުރިއަށް ގެންދަނީ ރިލިއަން 3.0 ހޮޅިދަނޑިގައެވެ (42). ޑޯޒް ވެއިޓިންގ އިން ބީމް މޮޝަން އިސްލާހު ކުރުމަށް މޯޝަންކޯރ 2 (43) ބޭނުންކޮށް، ދެން ސީޓީއެފް (ކޮންޓްރެސްޓް ޓްރާންސްފާ ފަންކްޝަން) ޕެރަމިޓަރ ކަނޑައެޅުމަށް ސީޓީއެފްއެފްއައިއެންޑީ 4.1 (44) ބޭނުންކުރުން. މި ފުރަތަމަ ޕްރޮސެސިންގ މަރުހަލާތަކަށްފަހު އާންމުކޮށް ނަގާ ފޮޓޯމައިކްރޯގްރާފްތައް ފޮޓޯ 2 ގައި އެވަނީއެވެ.S16. އޮޓޮމެޓިކް ސެލެކްޝަން ޓެމްޕްލޭޓް އުފައްދަނީ 250 ޕިކްސެލްގެ ފްރޭމެއްގައި 1000 ޕާރޓިކަލްގެ ގާތްގަނޑަކަށް 250 ޕިކްސެލް އަމިއްލައަށް ހޮވައި، ރެފަރެންސް ޓޫ-ޑައިމަންޝަނަލް (2ޑީ) ކްލަސިފިކޭޝަނެއް ނެތި، އެކަމުގެ ސަބަބުން ސާމްޕަލް ތަޣައްޔަރުވުމާ އެއްގޮތްވާ ނުވަތަ ފާހަގަކުރެވޭ ސިފަތަކެއް ނެތް ކްލަސިފިކޭޝަންތައް ދޮގުކޮށްގެންނެވެ. ދެން ހުރިހާ މައިކްރޯފޮޓޯގްރާފްތަކެއްގައި އޮޓޮމެޓިކް ސެލެކްޝަން ހެދިއިރު، RC-LH114-W ގައި 849،359 ޕާރޓިކަލް ހުރިއިރު، RC-LH116 ކޮމްޕްލެކްސްގައި 476،547 ޕާރޓިކަލް ހުއްޓެވެ. ހޮވާލެވުނު ހުރިހާ ޕާރޓިކަލްތަކަށް ނޮން-ރެފަރެންސް 2ޑީ ކްލަސިފިކޭޝަންގެ ދެ ބުރެއް ކުރިއަށް ގޮސްފައިވާއިރު، ކޮންމެ ރަންއަކަށްފަހު ކާބަން އޭރިއާއާ ދިމާވާ ޕާރޓިކަލްތައް، ސާމްޕަލް ތަޣައްޔަރުވުން، ފާހަގަކުރެވޭ ސިފައެއް ނެތް ނުވަތަ ވަރުގަދައަށް އެއްކޮށް ޖެހިފައިވާ ޕާރޓިކަލްތައް ރިޖެކްޓްވެ، ނަތީޖާއެއްގެ ގޮތުން 772،033 (90.9%) އަދި 359،678 (75.5%) ) ޕާރޓިކަލްސް ބޭނުންކުރަނީ 3ޑީ ކްލަސިފިކޭޝަން އޮފް އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު އަދި އާރްސީ-އެލްއެޗް116 އެވެ. ފުރަތަމަ 3ޑީ ރެފަރެންސް މޮޑެލް އުފެއްދީ ސްޓޮޗެސްޓިކް ގްރޭޑިއަންޓް ޑެސެންޓް މެތެޑެއް ބޭނުންކޮށްގެންނެވެ. ރިފަރެންސެއްގެ ގޮތުގައި އިންޓިޝިއަލް މޮޑެލް ބޭނުންކޮށްގެން، ހޮވާފައިވާ ޕާރޓިކަލްތައް 3ޑީގައި ހަތަރު ކެޓަގަރީއަކަށް ބަހާލެވިފައިވެއެވެ. މި ކެޓަގަރީގައިވާ މޮޑެލް ރެފަރެންސްގެ ގޮތުގައި ބޭނުންކޮށްގެން އެންމެ ބޮޑު ކެޓަގަރީގައި ހިމެނޭ ޕާރޓިކަލްތަކުގައި 3ޑީ ރިފައިނިންގ ކޮށް، ދެން ސޮލްވެންޓް އޭރިއާ ކަވަރު ކުރުމަށް އިސްލާމީ 15Å ލޯ ޕާސް ފިލްޓަރ ބޭނުންކޮށްގެން 6 ޕިކްސެލްގެ މަޑު ފަރާތްތައް އިތުރުކޮށް، ޓޮޕް ޑިޓެކްޓަރުގެ ގޭޓަން ކޭ2 ޕީކް މޮޑިއުލޭޝަން ޓްރާންސްފާ ފަންކްޝަން އިސްލާހު ކުރުމަށް ޕިކްސެލްތައް ޕޯސްޓް ޕްރޮސެސް ކޮށްލާށެވެ. RC-LH114-W ޑޭޓާސެޓަށް ބަލާއިރު، މި އިސްލާމީ މޮޑެލް ބަދަލުކޮށްފައިވަނީ މާސްކްގެ ކޮޅުތަކުގައި ހުންނަ ވަރުގަދަ ޑެންސިޓީ (ޔޫސީއެސްއެފް ޗައިމެރާގައި ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސް ޑެންސިޓީއާ ގުޅުން ކެނޑިފައިވާ) ނައްތާލައިގެންނެވެ. ނަތީޖާއެއްގެ ގޮތުން ލިބޭ މޮޑެލްތައް (RC-LH114-W އަދި RC-LH116 ގެ ރިޒޮލިއުޝަންތަކަކީ 3.91 އަދި 4.16 Å) 3ޑީ ކްލަސިފިކޭޝަންގެ ދެވަނަ ބުރަށް ރެފަރެންސްގެ ގޮތުގައި ބޭނުންކުރެއެވެ. ބޭނުންކުރާ ޕާރޓިކަލްތައް ގްރޫޕްކޮށްފައިވަނީ ފުރަތަމަ 3ޑީ ކްލާހަށް ކަމަށާއި، އެ ޕާރޓިކަލްތަކުގައި އަވަށްޓެރި ރަށްރަށާ ވަރުގަދަ ގުޅުމެއް ނެތް ކަމަށެވެ. ފާޅުވާ ސްޓްރަކްޗަރަލް ފީޗާސްތައް އެއްކޮށް ޖެހިފައި ހުރުން ނުވަތަ ނެތުން. 3ޑީ ކްލަސިފިކޭޝަންގެ ދެވަނަ ބުރަށްފަހު އެންމެ މަތީ ރިޒޮލިއުޝަން ލިބިފައިވާ ކެޓަގަރީ ހޮވާފައިވަނީ [RC-LH114-W އަށް އެއް ކެޓަގަރީއަކީ 377,703 ޕާރޓިކަލް (44.5%)، RC-LH116 އަށް ދެ ކެޓަގަރީއެއް ހުރެއެވެ، ​​ޖުމްލަ 260،752 ޕާރޓިކަލް (54.7%) , މިތަނުގައި އެއީ އެއް ކެޓަގަރީއެއް ހުންނަނީ ހަމައެކަނި ފުރަތަމަ އެނބުރުމަށްފަހު ކުޑަ ތަފާތަކާއެކު އެލައިން ކުރުމުންނެވެ]. އަދި ހޮވާފައިވާ ޕާޓިކަލްތައް އަލުން 400 ޕިކްސެލްގެ ފޮށްޓެއްގައި ނަގައި 3ޑީ ރިފައިނިން މެދުވެރިކޮށް ރީފައިން ކުރެ އެވެ. ސޮލްވެންޓް މާސްކް އުފައްދަނީ ފުރަތަމަ 15Å ލޯ ޕާސް ފިލްޓަރާއި 3 ޕިކްސެލްގެ މެޕް އެކްސްޕެންޝަން އަދި 3 ޕިކްސެލްގެ ސޮފްޓް މާސްކް ބޭނުންކޮށްގެންނެވެ. ޕަރ ޕާރޓިކަލް ސީޓީއެފް ރިފައިންމަންޓް ބޭނުންކޮށްގެން، ޕަރ ޕާރޓިކަލް މޯޝަން ކަރެކްޝަން އަދި ޕަރ ޕާރޓިކަލް ސީޓީއެފް ރިފައިންމަންޓްގެ ދެވަނަ ބުރު، ކޮންމެ ފިޔަވަޅަކަށްފަހު 3ޑީ ރިފައިންމަންޓް، ސޮލްވެންޓް މާސްކިންގ އަދި ޕޯސްޓް ޕްރޮސެސިންގ ކޮށްގެން ލިބޭ ޓެކްސްޗަރ އިތުރަށް ރީފައިން ކުރެވެއެވެ. އެފްއެސްސީ (ފޫރިއާ ޝެލް ކޯރިލޭޝަން ކޯއެފިޝަން) ކަޓްއޮފް ވެލިއު 0.143 ބޭނުންކޮށްގެން، RC-LH114-W އަދި RC-LH116 ގެ ފައިނަލް މޮޑެލްތަކުގެ ރިޒޮލިއުޝަންތަކަކީ 2.65 އަދި 2.80Å އެވެ. ފައިނަލް މޮޑެލްގެ އެފްއެސްސީ ކަރވް ދައްކާފައިވަނީ ފޮޓޯ 2. S17.
ހުރިހާ ޕްރޮޓީން ސިކުއެންސްއެއް ޑައުންލޯޑް ކުރެވެނީ ޔުނިޕްރޮޓްކޭބީ: LH1-β (PufB; UniProt ID: Q6N9L5) އިންނެވެ؛ LH1-α (PufA؛ ޔުނިޕްރޮޓްއައިޑީ: Q6N9L4)؛ އާރްސީ-އެލް (ޕަފްއެލް؛ ޔުނިޕްރޮޓް އައިޑީ: އޯ83005)؛ އާރްސީ-އެމް (ޕަފްއެމް؛ ޔުނިޕްރޮޓް އައިޑީ: އޭ0އޭ4ޒެޑް7)؛ އާރްސީ-އެޗް (ޕޫހްއޭ؛ ޔުނިޕްރޮޓް އައިޑީ: އޭ0އޭ4ޒެޑް9)؛ ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު (ޕަފްޑަބްލިއު؛ ޔުނިޕްރޮޓް އައިޑީ: ކިއު6އެން1ކޭ3) އެވެ. އާރްސީ-އެލް، އާރްސީ-އެމް އަދި އާރްސީ-އެޗްގެ ޕްރޮޓީން ސިކުއެންސްތަކާއި އާރްބީއޭގެ ކްރިސްޓަލް ސްޓްރަކްޗަރ ހިމެނޭ ގޮތަށް އާރްސީގެ ހޯމޮލޮޖީ މޮޑެލްއެއް ހެދުމަށް SWISS-MODEL (45) ބޭނުންކުރިއެވެ. ޓެމްޕްލޭޓެއްގެ ގޮތުގައި ބޭނުންކޮށްފައިވަނީ sphaeroides RC (PDB ID: 5LSE) (46) އެވެ. ޔޫސީއެސްއެފް ޗައިމަރާގައިވާ “ފިޓް މެޕް” ޓޫލް ބޭނުންކޮށްގެން އުފައްދާ މޮޑެލް މެޕަށް ފިޓްކޮށް، ޕްރޮޓީން ސްޓްރަކްޗަރ ރަނގަޅުކޮށް، ކޯފެކްޓަރ [4×BChl a (މޮނޮމަރ ލައިބްރަރީ ރެޒިޑިއު ނަން = BCL)، 2×BPh a (BPH)، އެއް ނުވަތަ ދެ ވައްތަރެއްގެ UQ10 (U10)، އެއް ނޮން-ހީމް އަޔަން (Fe) އަދި އެއް 3،4-ޑައިހައިޑްރޯހެކްސާކާރބޮނައިލްކޮލައިން ބޭނުންކުރުން (QAK)] އިތުރުކުރުމަށް ކޫޓް (48) ބޭނުންކުރުން. މޮނޮމާ ލައިބްރަރީގައި ކިއުއޭކޭ ނުލިބޭތީ، ފީނިކްސް (49) ގައިވާ eLBOW ޓޫލް ބޭނުންކޮށްގެން ޕެރެމިޓަރައިޒް ކުރެވުނެވެ.
ދެން އުފެއްދީ އެލްއެޗް1 ސަބްޔުނިޓް އެވެ. ފުރަތަމަ ފަހަރަށް PHENIX (49) ގައިވާ އޮޓޮމެޓިކް ކޮންސްޓްރަކްޝަން ޓޫލް ބޭނުންކޮށްގެން މެޕް އަދި LH1-α އަދި LH1-β ޕްރޮޓީން ސިކުއެންސް އިންޕުޓްގެ ގޮތުގައި ބޭނުންކޮށްގެން LH1 ސިކުއެންސްގެ ބައެއް އޮޓޮމެޓިކުން ކޮންސްޓްރަކްޓް ކުރިއެވެ. އެންމެ ފުރިހަމަ އެލްއެޗް1 ސަބްޔުނިޓް ހޮވައި، ނެގުމަށްފަހު ކޫޓަށް ލޯޑްކޮށް، އޭގައި ގެއްލިފައިވާ ސިކުނޑި އަމިއްލައަށް އިތުރުކޮށް، ދެ ބީސީއެލް a (BCL) އަދި ސްޕިރިލޮކްސަންތިން (CRT) އެއް އިތުރުކުރުމުގެ ކުރިން މުޅި ސްޓްރަކްޗަރ އަމިއްލައަށް ރީފައިންކުރުން [ކަމާބެހޭ Rps އަށް ބަލާފައި LH1 ކޮމްޕްލެކްސްގެ ޑެންސިޓީއާއި އެނގޭ ކެރޮޓީނޮއިޑް ކޮންޓެންޓް. ވައްތަރު (17)]. ފުރިހަމަ އެލްއެޗް1 ސަބްޔުނިޓް ކޮޕީކޮށް، ޔޫސީއެސްއެފް ޗައިމަރާ “ޑޮކިންގ މެޕް ޓޫލް” ބޭނުންކޮށްގެން އެލްއެޗް1 ޑެންސިޓީގެ ކައިރީގައިވާ ނޮން މޮޑެލް އޭރިއާގައި ޑޮކްކޮށް، ދެން ކޫޓްގައި ރީފައިންކުރުން؛ ހުރިހާ އެލްއެޗް1 ސަބްޔުނިޓްތަކެއް މޮޑެލް ކުރެވެންދެން މި ޕްރޮސެސް ތަކުރާރުކުރުން. RC-LH114-W ސްޓްރަކްޗަރ އަށް، ކޫޓްގައި ހުންނަ އަންއެލޮކޭޓެޑް ޑެންސިޓީ ނެގުމުން، ޔޫއެސްސީއެފް ޗައިމަރާ މެޕްގައި ބާކީ ހުރި ނޮން-ޕްރޮޓީން ކޮމްޕޯނެންޓްތަކުން ޕްރޮޓީން ސެގްމެންޓްކޮށް، އޮޓޯބިލްޑް ޓޫލް ބޭނުންކޮށްގެން އިސްލާމީ މޮޑެލް ގާއިމްކޮށް، ބާކީ ހުރި ސަބްޔުނިޓްތައް (ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު) މޮޑެލިންގ ބޭނުންކުރެއެވެ. ފީނިކްސް (49) ގައި. ކޫޓް (48) ގައިވާ ނަތީޖާ މޮޑެލްއަށް ގެއްލިފައިވާ ސިކުނޑިތައް އިތުރުކޮށް، ދެން މެނުއަލްކޮށް މުޅި ސަބްޔުނިޓް ރީފައިން ކުރާށެވެ. ބާކީ ހުރި ދޫނުކުރެވޭ ޑެންސިޓީ ލިޕިޑްސް (ޕީޑީބީ މޮނޮމާ ލައިބްރަރީ އައިޑީ އޮފް ސީޑީއެލް = ސީޑީއެލް، ޕީއޯޕީސީ = 6ޕީއެލް އަދި ޕީއޯޕީޖީ = ޕީޖީޓީ)، β-ޑީޑީއެމް ޑިޓާޖެންޓް (އެލްއެމްޓީ) އަދި ޔޫކިޔު10 މޮލިކިއުލްސް (ޔޫ10) ގެ ޖަމާއަތަށް ފިޓްވެއެވެ. މޮޑެލް ސްޓެޓިސްޓިކްސް އާއި ފިޓްގެ ވިޝުއަލް ކޮލިޓީ އިތުރަށް ރަނގަޅު ނުކުރެވޭހާ ހިނދަކު ފުރިހަމަ އިންޓިޝިއަލް މޮޑެލް ފުރިހަމަ ކުރުމަށް ކޫޓް (48) ގައި ފީނިކްސް އޮޕްޓިމައިޒޭޝަން (49) އަދި މެނުއަލް އޮޕްޓިމައިޒޭޝަން ބޭނުން ކުރާށެވެ. އެންމެ ފަހުން ލޯކަލް މެޕް ތޫނުކުރުމަށް ލޮކްސްކޭލް (50) ބޭނުންކޮށް، ދެން އަންއެލޮކޭޓެޑް ޑެންސިޓީ މޮޑެލްކުރުމާއި އޮޓޮމެޓިކް އަދި މެނުއަލް އޮޕްޓިމައިޒޭޝަންގެ އެހެން ބައެއް ސައިކަލްތައް ކުރިއަށް ގެންދިއުން.
އެކި ޕެޕްޓައިޑްތަކާއި، ކޯފެކްޓަރސް އަދި އެހެނިހެން ލިޕިޑްތަކާއި ކުއިންއޯންސް އެމީހުންގެ ޑެންސިޓީތަކުގެ ތެރޭގައި ޑޮކްކޮށްފައިވާ ފޮޓޯ 1 އަދި 2 ގައި އެވަނީ S18 އިން S23 އަށެވެ. ފައިނަލް މޮޑެލްގެ ތަފާސްހިސާބު މަޢުލޫމާތު ތާވަލް S1 ގައި އެވަނީއެވެ.
އެހެން ގޮތަކަށް ބަޔާންކޮށްފައި ނުވާނަމަ، ޔޫވީ/ވިސް/އެންއައިއާރު އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރާ އެއްކޮށްފައިވަނީ ކެރީ60 ސްޕެކްޓްރޯފޮޓޯމީޓަރ (އެޖިލެންޓް، ޔޫ.އެސް.އޭ) ގައި 250 ނޯޓް މީޓަރާއި 1000 ނޯޓް މީޓަރަށް 1 ނޯޓް މީޓަރުގެ އިންޓަވަލްތަކެއްގައި އަދި 0.1 ސެކަންޑްގެ އިންޓަގްރޭޝަން ޓައިމްގައެވެ.
1 ގެ A880 އަށް 2 އެމްއެމް މަގެއް ހުންނަ ކުއާރޓްސް ކިއުވެޓެއްގައި ސާމްޕަލް ޑައިލޫޓްކޮށް، 400 އާއި 1000 ނޯޓް މީޓަރާއި ދެމެދުގެ އެބްޒޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރަމް އެއްކުރުން. މި ސާރކިއުލަރ ޑައިކްރޮއިކް ސްޕެކްޓްރާ އެއްކޮށްފައިވަނީ ޖަސްކޯ 810 ސްޕެކްޓްރޯޕޮލަރިމީޓަރ (ޖާސްކޯ، ޖަޕާން) ގައި 400 ނޯޓް މީޓަރާއި 950 ނޯޓް މީޓަރާއި ދެމެދުގެ 1 ނޯޓް މީޓަރުގެ އިންޓަވަލްތަކެއްގައި 20 ނޯޓް މީޓަރު މިނިޓް-1 ގެ ސްކޭން ރޭޓެއްގައެވެ.
މޮލާރ އެކްސްޓިންކްޝަން ކޯއެފިޝަން ކަނޑައެޅެނީ ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސް ގާތްގަނޑަކަށް 50 ގެ A880 އަށް ޑައިލޫޓްކޮށްގެންނެވެ.10μl ވޮލިއުމް 990μl ބައިންޑިންގ ބަފަރ ނުވަތަ މެތަނަލްގައި ޑައިލޫޓްކޮށް، ވަގުތުން އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރަމް އެއްކޮށްގެން BChl ޑިގްރެޑޭޝަން އެންމެ ކުޑަކުރުން. ކޮންމެ މެތަނަލް ސާމްޕަލެއްގައި ބީސީއެލް ކޮންޓެންޓް ކަނޑައެޅީ 54.8 އެމްއެމް-1 ސެންޓިމީޓަރު-1 ގެ 771 ނޯޓް މީޓަރުގައި ހުންނަ އެކްސްޓިންކްޝަން ކޯއެފިޝަން އިން ކަމަށާއި، އެކްސްޓިންކްޝަން ކޯއެފިޝަން ކަނޑައެޅީ (51) އެވެ. މިންކުރެވުނު ބީސީއެޗްއެލް ކޮންސެންޓްރޭޝަން 32 (RC-LH114-W) ނުވަތަ 36 (RC-LH116) އަށް ބަހާލައިގެން ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސް ކޮންސެންޓްރޭޝަން ކަނޑައެޅުމުން، އެއަށްފަހު ބަފަރ އެކްސްޓިންކްޝަން ކޯއެފިޝަންގައި އެއްކުރި ހަމަ ސާމްޕަލްގެ އެބްސޯޕްޝަން ސްޕެކްޓްރަމް ކަނޑައެޅުން. ޕަރެލަލް. ކޮންމެ ސާމްޕަލަކަށް ތަކުރާރުކޮށް ތިން ފަހަރު މިންކުރުމަށްފަހު، ހިސާބުކުރުމަށް ބޭނުންކޮށްފައިވަނީ BChl Qy މެކްސިމަމްގެ އެވްރެޖް އެބްޒޯރބަންސް އެވެ. 878 ނޯޓް މީޓަރުގައި ވަޒަންކުރެވޭ RC-LH114-W ގެ އެކްސްޓިންކްޝަން ކޯއެފިޝަންސް އަކީ 3280±140 mM-1 cm-1 ކަމަށާއި، 880 ނޯޓް މީޓަރުގައި ވަޒަންކުރެވޭ RC-LH116 ގެ އެކްސްޓިންކްޝަން ކޯއެފިޝަން އަކީ 3800±30 mM-1 cm-1 ކަމަށް ވެސް ޑރ.
ޔޫކިއު10 ގެ މިންވަރު ކަނޑައެޅީ (52) ގައިވާ ގޮތުގެ މަތިންނެވެ. ކުރުކޮށް ބުނާނަމަ ރިވަރސް ފޭސް އެޗްޕީއެލްސީ (އާރްޕީ-އެޗްޕީއެލްސީ) ހެދީ އެޖިލެންޓް 1200 އެޗްޕީއެލްސީ ސިސްޓަމް ބޭނުންކޮށްގެންނެވެ. 0.02% (w/v) ފެރިކް ކްލޮރައިޑް ހިމެނޭ 50:50 މެތަނަލް:ކްލޮރޯފޯމްގެ 50μl ގައި ގާތްގަނޑަކަށް 0.02 nmol ގެ RC-LH116 ނުވަތަ RC-LH114-W ގިރާލުމަށްފަހު، ޕްރީ އިކުއިލިބްރޭޓް ކޮށްފައިވާ ބެކްމަން ކަލްޓަރ އަލްޓްރާސްފިއާ ODS 4.6 mm އިންޖެކްޓްކޮށް 1 ml-1 min-1 ގައި 40°C ގައި އެޗްޕީއެލްސީގައި ގިރާލާށެވެ ×25 ސެންޓިމީޓަރުގެ ކޮލަމެއްގައި ސޮލްވެންޓް (80:20 މެތަނަލް:2-ޕްރޮޕެނަލް) ޖަހާފައި ހުރެއެވެ. އެޗްޕީއެލްސީ ސޮލްވެންޓެއްގައި އައިސޮކްރެޓިކް އިލޫޝަން ކޮށްގެން 275 ނޯޓް މީޓަރު (UQ10)، 450 ނޯޓް މީޓަރު (ކެރޮޓީނޮއިޑްސް) އަދި 780 ނޯޓް މީޓަރު (BChl) ގައި 1 ގަޑިއިރު ވަންދެން އެބްޒޯރބަންސް މޮނިޓަރ ކުރުން. 275 ނޯޓް މީޓަރުގެ ކްރޮމެޓޯގްރާމްގައި 25.5 މިނެޓުގައި ޕީކް އިންޓަގްރޭޓް ކުރެވުނުއިރު، އޭގައި ފާހަގަކުރެވޭ އެހެން އެއްވެސް ކޮމްޕައުންޑެއް ނުހިމެނެއެވެ. އިންޓަގްރޭޓެޑް އޭރިއާ ބޭނުންކޮށްގެން 0 އިން 5.8 ނޯޓްމޯލް އަށް ޕިއުރ ސްޓޭންޑަރޑްސް އިންޖެކްޓް ކުރުމުން ހޯދި ކެލިބްރޭޝަން ކަރވް އަށް ރިއާޔަތްކޮށް ޔޫކިޔު10 ނެގިފައިވާ މޮލާރ އަދަދު ކަނޑައެޅެއެވެ (ފޮޓޯ S14). ކޮންމެ ސާމްޕަލެއް ވެސް ތިން ރިޕްލިކޭޓެއްގައި ތަހުލީލުކޮށްފައިވާއިރު، ރިޕޯޓްކޮށްފައިވާ ގޯހަކީ އެވްރެޖްގެ އެސްޑީއާ ދިމާވާ ގޯހެކެވެ.
30 μM ރިޑޫސްޑް ހޯސް ހާޓް ސައިޓޮކްރޯމް c2 (Merck, UK) އަދި 0 އިން 50 μMUQ2 (Merck, UK) އިން މެކްސިމަމް Qy އެބްސޯޕްޝަން 0.1 ގެ RC-LH1 ކޮމްޕްލެކްސް ހިމެނޭ ސޮލިއުޝަނެއް ތައްޔާރުކުރިއެވެ. ކޮންމެ ޔޫކިއު2 ކޮންސެންޓްރޭޝަނެއްގައި 1 މިލިލީޓަރުގެ ތިން ސާމްޕަލް ތައްޔާރުކޮށް، މިންކުރުމުގެ ކުރިން އަނދިރީގައި ފުރިހަމައަށް އެޑެޕްޓްވުން ޔަގީންކުރުމަށްޓަކައި 4 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި އަނދިރީގައި އެއްރޭ ވަންދެން އިންކިއުބޭޓް ކުރިއެވެ. މި ސޮލިއުޝަން ލޯޑްކޮށްފައިވަނީ 300 ނޯޓް މީޓަރުގެ ފްލޭމް/500 ލައިން ގްރޭޓިންގ އާއި 1.24 އެމްއެމް އިންލެޓް، 0.12 އެމްއެމް މެދު އަދި 0.6 އެމްއެމް އައުޓްލެޓް ސްލިޓް ޖަހާފައިވާ އޮލިސް އާރުއެސްއެމް1000 މޮޑިއުލާ ސްޕެކްޓްރޯފޮޓޯމީޓަރަކަށެވެ. އެކްސައިޓޭޝަން އަލި ނުހިމެނޭ ގޮތަށް ސާމްޕަލް ފޮޓޯޓިއުބާއި ރެފަރެންސް ފޮޓޯމަލްޓިޕްލައިއާ ހޮޅީގެ ވަދެވޭ ހިސާބުގައި 600 ނޯޓް މީޓަރުގެ ލޯންގް ޕާސް ފިލްޓަރެއް ބަހައްޓާފައިވެއެވެ. އެބްޒޯރބަންސް މޮނިޓަރ ކުރެވުނީ 550 ނޯޓް މީޓަރުގައި އިންޓަގްރޭޝަން ޓައިމް 0.15 ސެކުންޓެވެ. މި އެކްސައިޓޭޝަން އަލި 880 ނޯޓް މީޓަރުގެ M880F2 އެލްއީޑީ (ލައިޓް އެމިޓިންގ ޑައިއޯޑް) (ތޯރލެބްސް ލިމިޓެޑް، ޔޫކޭ) އިން ފައިބަރ އޮޕްޓިކް ކޭބަލް މެދުވެރިކޮށް %90 އިންޓެންސިޓީގައި ޑީސީ2200 ކޮންޓްރޯލަރ (ތޯރލެބްސް ލިމިޓެޑް، ޔޫކޭ) މެދުވެރިކޮށް ދޫކުރާއިރު، އަލި އުފައްދާ ތަނަށް ދޫކުރަނީ 90° ގެ އެންގްލެއްގައެވެ. މިސަރ ބީމް ލޯގަނޑާ އިދިކޮޅުކޮށްފައި ހުންނަނީ ފުރަތަމަ ސާމްޕަލް އިން ޖަހައިގަތް އެއްވެސް އަލިކަމެއް އަނބުރާ ދިނުމަށެވެ. 50 s ގެ އަލިވުމުގެ 10 s ކުރިން އެބްޒޯރބަންސް މޮނިޓަރ ކުރުން. ދެން ކިނޮލޯލް އަމިއްލައަށް ސައިޓޮކްރޯމް c23 + ދަށްކުރާ މިންވަރު ވަޒަންކުރުމަށްޓަކައި އަނދިރީގައި 60 s އަށް އެބްޒޯރބަންސް އިތުރަށް މޮނިޓަރ ކުރެވުނެވެ (ރޯ ޑޭޓާއަށް ފޮޓޯ S8 ބައްލަވާ).
މި ޑޭޓާ ޕްރޮސެސްކޮށްފައިވަނީ 0.5 އާއި 10 s ގެ ތެރޭގައި ލައިނަރ އިންޓިޝިއަލް ރޭޓެއް (ޔޫކިއު2 ކޮންސެންޓްރޭޝަނަށް ބަލާފައި) ފިޓްކޮށް، ކޮންމެ ޔޫކިއު2 ކޮންސެންޓްރޭޝަނެއްގައި ތިން ސާމްޕަލްގެ ރޭޓް އެވްރެޖްކޮށްގެންނެވެ. އެކި އެކްސްޓިންކްޝަން ކޯއެފިޝަންސް އިން ގުނާފައިވާ އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮންސެންޓްރޭޝަން ބޭނުންކޮށްގެން ރޭޓް ކެޓަލައިޓިކް އެފިޝަންސީއަށް ބަދަލުކޮށް، އޮރިޖިން ޕްރޯ 2019 (އޮރިޖިންލެބް، ޔޫއެސްއޭ) ގައި ޕްލޮޓްކޮށް، މައިކަލިސް-މެންޓެން މޮޑެލްއަށް ފިޓްކޮށް، ފެންނަ ކިލޯމީޓަރާއި ކޭކެޓް އަގުތައް ކަނޑައެޅިއެވެ.
ޓްރާންސިއެންޓް އެބްސޯޕްޝަން މީސަރމަންޓްތަކަށް RC-LH1 ސާމްޕަލް ~2μM އަށް ޑައިލޫޓްކޮށްފައިވަނީ 50 mM ސޯޑިއަމް އެސްކޯބެޓް (Merck, USA) އަދި 0.4 mM Terbutin (Merck, USA) ހިމެނޭ IMAC ބަފަރުގައެވެ. އެސްކޯބިކް އެސިޑް ބޭނުންކުރަނީ ޤުރުބާނީ އިލެކްޓްރޯން ޑޯނަރެއްގެ ގޮތުގައި ކަމަށާއި، ޓާރޓް-ބިއުޓަކްލޮފެން ބޭނުންކުރަނީ ކިއުބީ އިންހިބިޓަރެއްގެ ގޮތުގައި ކަމަށާއި، މިއީ މުޅި މިންކުރުމުގެ ޕްރޮސެސްގައި މައިގަނޑު އާރްސީ ޑޯނަރ ދަށްވެފައި (އެބަހީ ފޮޓޯއޮކްސިޑައިޒް ނުވެ) ހުންނަކަން ކަށަވަރުކުރުމަށެވެ. ގާތްގަނޑަކަށް 3 މިލިލީޓަރުގެ ސާމްޕަލް 2 އެމްއެމް އޮޕްޓިކަލް މަގު ދިގުމިނެއް ހުންނަ ކަސްޓަމް ރޮޓޭޓިންގ ސެލް (ގާތްގަނޑަކަށް 0.1 މީޓަރުގެ ދިގުމިން، 350 އާރުޕީއެމް) އަށް އިތުރުކޮށް، ލޭޒަރ މަގުގައިވާ ސާމްޕަލްއަށް އެކްސައިޓޭޝަން ޕަލްސްތަކުގެ މެދުގައި އަނދިރި އެޑެޕްޓޭޝަން އަށް އެކަށީގެންވާ ވަގުތު ލިބޭތޯ ބެލުން. ~100-fs ލޭޒަރ ޕަލްސް ބޭނުންކޮށްގެން Ti: Sapphire ލޭޒަރ ސިސްޓަމް (ސްޕެކްޓްރާ ފިޒިކްސް، ޔޫ.އެސް.އޭ) އެމްޕްލިފައިކޮށްގެން 880 nm ގައި 1 kHz (NIR އަށް 20 nJ ނުވަތަ Vis އަށް 100 nJ) ގެ ރިޕީޓިޝަން ރޭޓެއްގައި ސާމްޕަލް އެކްސައިޓްކުރުން. ޑޭޓާ އެއްކުރުމުގެ ކުރިން ސާމްޕަލް އެކްސައިޓޭޝަން އަލިން ގާތްގަނޑަކަށް 30 މިނެޓް ވަންދެން ބެހެއްޓުން. އެކްސްޕޯޒް ވުމުން ކިއުއޭ އިންއެކްޓިވޭޓް ވުން (އެއީ އެއްފަހަރު ނުވަތަ ދެފަހަރު ކިއުއޭ ދަށްވުން އެކަށީގެންވާ) އެވެ. އެކަމަކު ފާހަގަކޮށްލަންޖެހޭ ކަމަކީ މި ޕްރޮސެސް ރިވަރސިބަލް ވާނީ ދިގު މުއްދަތަކަށް ޑާކް އެޑެޕްޓޭޝަން އަށް ފަހު އާރްސީ މަޑުމަޑުން ކިއުއޭ އެކްޓިވިޓީއަށް އެނބުރި އަންނާނެތީ އެވެ. -10 އާއި 7000 ޕީއެސް އާއި ދެމެދުގެ ޑިލޭ ޓައިމް އާއި އެކު ޓްރާންސިއެންޓް ސްޕެކްޓްރާ ވަޒަންކުރުމަށް ހެލިއޯސް ސްޕެކްޓްރޯމީޓަރ (އަލްޓްރާފާސްޓް ސިސްޓަމްސް، ޔޫ.އެސް.އޭ) ބޭނުންކުރިއެވެ. ޑޭޓާ ސެޓްތައް އަންގްރޫޕް ކުރުމަށްފަހު، މާރޖްކޮށް ސްޓޭންޑަރޑައިޒް ކުރުމަށް ސަރފޭސް އެކްސްޕްލޯރަރ ސޮފްޓްވެއަރ (އަލްޓްރާފާސްޓް ސިސްޓަމްސް، ޔޫ.އެސް.އޭ) ބޭނުންކުރުން. ޑީކޭއާ ގުޅުންހުރި ޑިފެރެންޝަލް ސްޕެކްޓްރާ ހޯދުމަށް ކޮމްބައިންޑް ޑޭޓާ ސެޓް ބޭނުންކުރުމަށް ކާޕެޓްވިއު ސޮފްޓްވެއާ ޕެކޭޖް (ލައިޓް ކޮންވާޝަން ލިމިޓެޑް، ލިތުއޭނިއާ) ބޭނުންކުރުން، ނުވަތަ އޮރިޖިން (އޮރިޖިންލެބް، ޔޫ.އެސް.އޭ) ގައި ސިންގަލް ވޭވްލެންޖް ސްޕެކްޓްރަލް އިވޮލޫޝަން ފިޓްކުރުމަށް އިންސްޓްރޫމެންޓް ރިސްޕޮންސްއާއެކު އެތައް އެކްސްޕޮނޭންޓެއް ކޮންވޮލްވްކުރާ ފަންކްޝަނެއް ބޭނުންކުރުން.
މަތީގައި ބަޔާންކުރެވުނު ފަދައިން (53) އާރްސީ އަދި ޕެރިފެރަލް އެލްއެޗް2 އެންޓެނާ ވެސް ނެތް އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސް ހިމެނޭ ފޮޓޯސިންތެޓިކް ފިލްމެއް ތައްޔާރުކޮށްފައިވެއެވެ. މި މެމްބަރޭން 20 އެމްއެމް ޓްރިސް (ޕީއެޗް 8.0) ގައި ޑައިލޫޓްކޮށްލުމަށްފަހު 2 އެމްއެމް އޮޕްޓިކަލް ޕަތެއް ހުންނަ ކުއާރޓްސް ކިއުވެޓަކަށް ލޯޑް ކުރިއެވެ. 30nJ ލޭޒަރ ޕަލްސް ބޭނުންކޮށްގެން 540 ނޯޓް މީޓަރުގައި -10 އާއި 7000 ޕީއެސް އާއި ދެމެދުގެ ޑިލޭ ޓައިމް އާއި އެކު ސާމްޕަލް އެކްސައިޓް ކުރިއެވެ. އާރުޕީއެސް އަށް ބަޔާންކޮށްފައިވާ ގޮތަށް ޑޭޓާ ސެޓް ޕްރޮސެސްކުރުން. ޕަލް ސާމްޕަލް.
މި މެމްބަރޭން 150،000 RCF ގައި 4 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި 2 ގަޑިއިރު ވަންދެން ސެންޓްރިފިގޭޝަން ކޮށްގެން ޕެލެޓްކޮށް، އޭގެ ފަހުން 880 ނޯޓް މީޓަރުގައި އޭގެ އެބްޒޯރބަންސް 20 mM tris-HCl (pH 8.0) އަދި 200 mM NaCl ގައި އަލުން ސަސްޕެންޑް ކުރިއެވެ. %2 (w/v) β-DDM ގައި 4 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި އަނދިރީގައި 1 ގަޑިއިރު ވަންދެން މަޑުމަޑުން ހޫނުކޮށްގެން މެމްބަރޭން ގިރާލާށެވެ. މި ސާމްޕަލް 100 އެމްއެމް ޓްރައިއެތިލަމޮނިއަމް ކާބޮނެޓް (ޕީއެޗް 8.0) (ޓީއީއޭބީ؛ މެރކް، ޔޫކޭ) ގައި 2.5 މިލިގްރާމް އެމްއެލް-1 ގެ ޕްރޮޓީން ކޮންސެންޓްރޭޝަން އަށް ޑައިލޫޓް ކޮށްފައިވެއެވެ (ބަޔޯ-ރެޑް އެނަލިސިސް). އިތުރަށް ޕްރޮސެސިންގ ކުރިއަށް ގެންގޮސްފައިވަނީ ކުރިން ޝާއިޢުކޮށްފައިވާ އުސޫލުން (54)، 50 μg ޕްރޮޓީން %1 (w/v) ސޯޑިއަމް ލޯރޭޓް (Merck, UK) ހިމެނޭ ޖުމްލަ 50 μl ޓީއީއޭބީ އަށް ޑައިލޫޝަން ކުރުމުން ފެށިގެންނެވެ. 60 s އަށް ސޮނިކޭޝަން އަށް ފަހު، 37 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި 30 މިނެޓް ވަންދެން 5 އެމްއެމް ޓްރިސް (2-ކާރބޮކްސީއެތައިލް) ފޮސްފިން (މެރކް، ޔޫކޭ) އިން ރިޑޫސް ކުރިއެވެ. އެސް-އެލްކައިލޭޝަން އަށް 10 އެމްއެމް މެތައިލް އެސް-މެތައިލްތިއޯމީތޭންސަލްފޮނެޓް (މެރކް، ޔޫކޭ) އާއި އެކު ސާމްޕަލް އިންކިއުބޭޓްކޮށް، 200 އެމްއެމް އައިސޯޕްރޮޕެނަލް ސްޓޮކް ސޮލިއުޝަނުން ކޮޓަރީގެ ފިނިހޫނުމިނުގައި 10 މިނެޓް ވަންދެން އަޅާށެވެ. ޕްރޮޓީއޮލައިޓިކް ޑައިޖެސްޝަން ކުރިއަށް ގެންގޮސްފައިވަނީ 2 μg ޓްރިޕްސިން/އެންޑޯޕްރޮޓީނޭޒް ލައިސް-ސީ މިކްސްޗަރ (ޕްރޮމެގާ ޔޫކޭ) އަޅައި 37 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސްގައި 3 ގަޑިއިރު ވަންދެން އިންކިއުބޭޓްކޮށްގެންނެވެ. ލޯރޭޓް ސަރފެކްޓެންޓް ނެގީ 50 μl އެތައިލް އެސިޓެޓް އަދި 10 μl 10% (v/v) LC ގްރޭޑް ޓްރައިފްލޫރޯއެސިޓިކް އެސިޑް (TFA; Thermo Fisher Scientific, UK) އަޅައި 60 s ވަންދެން ވޯރޓެކްސްކޮށްގެންނެވެ. މި ފޭސް ސެޕަރޭޝަން ޕްރޮމޯޓް ކޮށްފައިވަނީ 15،700 އާރުސީއެފް ގައި 5 މިނެޓް ވަންދެން ސެންޓްރިފިގޭޝަން ކޮށްގެންނެވެ. އުފެއްދުންތެރިޔާގެ ޕްރޮޓޮކޯލްގައިވާ ގޮތުން ޕެޕްޓައިޑް ހިމެނޭ ތިރީ ފޭސް ފަރުވާތެރިކަމާއެކު އެސްޕިރޭޓްކޮށް ލޮނު ނައްތާލުމަށް ސީ18 ސްޕިން ކޮލަމް (ތަރމޯ ފިޝަރ ސައިންޓިފިކް، ޔޫކޭ) ބޭނުންކުރިއެވެ. ވެކިއުމް ސެންޓްރިފިގޭޝަން އިން ހިއްކުމަށްފަހު %0.5 ޓީއެފްއޭ އަދި %3 އެސިޓޮނިޓްރައިލްގައި ސާމްޕަލް ގިރާލުމަށްފަހު، ކުރިން ތަފްސީލުކޮށްފައިވާ ސިސްޓަމް ޕެރަމިޓަރސް ބޭނުންކޮށްގެން މާސް ސްޕެކްޓްރޮމެޓްރީ އާއި ގުޅިފައިވާ ނެނޯފްލޯ އާރްޕީ ކްރޮމެޓޮގްރަފީ އިން 500 ނގ ތަޙުލީލުކޮށްފައިވެއެވެ.
ޕްރޮޓީން ދެނެގަތުމާއި ކިއުއަންޓިފިކޭޝަން އަށް މެކްސްކުއަންޓް v.1.5.3.30 (56) ބޭނުންކޮށްގެން އާރްޕީއެސް ހޯދުމަށް ބޭނުންކުރުން. ޕަލޫސްޓްރިސް ޕްރޮޓީއޯމް ޑޭޓާބޭސް (www.uniprot.org/proteomes/UP000001426) އެވެ. މާސް ސްޕެކްޓްރޯމެޓްރީ ޕްރޮޓީއޮމިކްސް ޑޭޓާ ޕްރޮޓީއޯމްއެކްސްޗޭންޖް އެލަޔަންސްގައި ޕްރައިޑް ޕާޓްނަރ ރިޕޮޒިޓަރީ (http://proteomecentral.proteomexchange.org) މެދުވެރިކޮށް ޑޭޓާސެޓް އައިޑެންޓިފައިޓަރ PXD020402 ގެ ދަށުން ޖަމާކޮށްފައިވެއެވެ.
އިލެކްޓްރޯސްޕްރޭ އަޔަނައިޒޭޝަން މާސް ސްޕެކްޓްރޯމެޓްރީ އާއި ގުޅިގެން އާރްޕީއެލްސީ އިން ތަޙުލީލުކުރުމަށްޓަކައި، އާރްސީ-އެލްއެޗް1 ކޮމްޕްލެކްސް ތައްޔާރުކޮށްފައިވަނީ ވައިލްޑް ޓައިޕް އާރްޕީއެސް އިންނެވެ. ކުރިން ޝާއިޢުކޮށްފައިވާ ގޮތް (16) ބޭނުންކޮށްގެން ޕެލަސްޓްރިސް ސެލްތަކުގައި އުފެދޭ ޕްރޮޓީން ކޮންސެންޓްރޭޝަން އަކީ 20 އެމްއެމް ހެޕެސް (pH 7.8)، 100 mM NaCl އަދި 0.03% (w/v) β- (Bio-Rad analysis) ) DDM ގައި 2 mg ml-1 އެވެ. އުފެއްދުންތެރިޔާގެ ޕްރޮޓޮކޯލްގައިވާ ގޮތުން 2ޑީ ޕިއުރިފިކޭޝަން ކިޓް (ޖީއީ ހެލްތްކެއާ، ޔޫއެސްއޭ) ބޭނުންކޮށްގެން ޕްރެސިޕިޓޭޝަން މެތެޑުން 10 μg ޕްރޮޓީން ނަގައި، ޕްރެސިޕިޓޭޓް 20 μl 60% (v / v) ފޯމިކް އެސިޑް (FA)، 20% (v / v) އެސިޓޮނިޓްރައިލް އަދި 20% (v/v) ފެނުގައި ގިރާލާށެވެ. ފަސް މައިކްރޯލީޓަރު ތަޙުލީލުކޮށްފައިވަނީ މާސް ސްޕެކްޓްރޯމެޓްރީ (މެކްސިސް ޔޫއެޗްއާރު-ޓީއޯއެފް، ބްރޫކަރ) އާއި ގުޅިގެން އާރްޕީއެލްސީ (ޑައިއޮނެކްސް އާރުއެސްއެލްސީ) އިންނެވެ. 60 ޑިގްރީ ސެލްސިއަސް އަދި 100μlmin -1 ގައި ވަކިކުރުމަށް މެބްޕެކް 1.2×100 އެމްއެމް ކޮލަމް (ތަރމޯ ފިޝަރ ސައިންޓިފިކް، ޔޫކޭ) ބޭނުންކުރުން، %85 (v / v) ސޮލްވެންޓް އޭ [0.1% (v / v) އެފްއޭ އަދި 0.02% (V/v) ޓީއެފްއޭ އެކިއުސް ސޮލިއުޝަން] އިން 85%(v/v) ސޮލްވެންޓް ބީ އަށް ގްރޭޑިއަންޓް ކޮށްގެންނެވެ [90%(v/v) އެފްއޭ އަދި 90%(v/v) އެސިޓޮނިޓްރައިލް ޓީއެފްއޭގައި 0.02%(v/v)] ސްޓޭންޑަރޑް އިލެކްޓްރޯސްޕްރޭ އަޔަނައިޒޭޝަން ސޯސް އަދި ޑިފޯލްޓް ޕެރަމިޓަރސް ބޭނުންކޮށްގެން 60 މިނެޓަށްވުރެ ގިނައިރު މާސް ސްޕެކްޓްރޯމީޓަރުން 100 އާއި 2750 މީޓަރު/ޒެޑް (މާސް ޓު ޗާޖް ރޭޝިއޯ) ލިބެއެވެ. އެކްސްޕާސީ ބަޔޯއިންފޮމޭޓިކްސް ރިސޯސް ޕޯޓަލް ފައިންޑްޕެޕްޓް ޓޫލް (https://web.expasy.org/findpept/) ގެ އެހީގައި، މާސް ސްޕެކްޓްރަމް ކޮމްޕްލެކްސްގެ ސަބްޔުނިޓްތަކަށް މެޕް ކުރާށެވެ.
މި ސެލްތައް 100 މިލިލީޓަރުގެ އެންއެފް-ލޯ (10μMm-2 s-1)، މީޑިއަމް (30μMm-2 s-1) ނުވަތަ ހައި (300μMm-2 s-1) އަލިން 72 ގަޑިއިރު ވަންދެން ބޮޑުކުރިއެވެ. އެމް22 މީޑިއަމް (އެމް22 މީޑިއަމް އޭގައި އެމޯނިއަމް ސަލްފޭޓް ދޫކޮށްލާފައި ސޯޑިއަމް ސުކްސިނެޓްގެ ބަދަލުގައި ސޯޑިއަމް އެސިޓެޓް ޖަހާފައި ހުންނަ މީޑިއަމް) 100 މިލިލީޓަރުގެ ސްކްރޫ ޓޮޕް ފުޅިއެއްގައި (23) . 30-s ގެ ފަސް ސައިކަލްގައި 0.1 މައިކްރޯން ބިއްލޫރި ބީޑްސް 1:1 ގެ ވޮލިއުމް ރޭޝިއޯއެއްގައި ބީޑްކޮށްގެން ސެލްތައް ލައިޒްކޮށް އައިސް މަތީގައި 5 މިނެޓް ވަންދެން ފިނިކޮށްފައި ބެހެއްޓިއެވެ. މި އިންސޮލޫބަލް މާއްދާއާއި، ފަޅައިގެން ނުދާ ސެލްތަކާއި، ބިއްލޫރި ބީޑްސް ނަގާފައިވަނީ ބެންޗްޓޮޕް މައިކްރޯސެންޓްރިފިއުޖްގައި 16،000 އާރުސީއެފްގައި 10 މިނެޓް ވަންދެން ސެންޓްރިފިގޭޝަން ކޮށްގެންނެވެ. މި މެމްބަރޭން ވަކިކޮށްފައިވަނީ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ގައި 100،000 RCF އާއި އެކު Ti 70.1 ރޯޓަރެއްގައި 40/15% (w/w) ސުކްރޯޒް ގްރޭޑިއަންޓާއެކު 10 ގަޑިއިރު ވަންދެންނެވެ.
އަޅުގަނޑުމެންގެ ކުރީގެ މަސައްކަތުގައި ބަޔާންކޮށްފައިވާ ފަދައިން، ޕަފްޑަބްލިއު (16) ގައި ހުންނަ ހިސް ޓެގް އިމިއުނޯޑެޓެކްޓް ކުރުން. ކުރުކޮށް ބުނާނަމަ، ޕިއުރިފައިޑް ކޯރ ކޮމްޕްލެކްސް (11.8 ނޯޓް މީޓަރު) ނުވަތަ 2x އެސްޑީއެސް ލޯޑިންގ ބަފަރ (މެރކް، ޔޫކޭ) ގައި އާރްސީގެ އެއް ކޮންސެންޓްރޭޝަން (ރިޑޫސްޑް ޑިފެރެންސް ސްޕެކްޓްރަމް އުނިކޮށް އޮކްސިޑޭޝަން އިން ކަނޑައެޅޭ އަދި ސްޓޭންޑް ޖެލްގައި ހުންނަ ލޯޑާ އެއްގޮތްކޮށްގެން) ހިމެނޭ މެމްބަރޭން ދެފަހަރު ޑައިލޫޓް ކޮށްފައިވެއެވެ. މި ޕްރޮޓީންތައް ވަކިކޮށްފައިވަނީ ރެޕްލިކާ 12% ބިސް-ޓްރިސް ނޫޕޭޖް ޖެލް (ތަރމޯ ފިޝަރ ސައިންޓިފިކް، ޔޫކޭ) އިންނެވެ. އާރްސީ-އެލް ސަބްޔުނިޓް ލޯޑްކޮށް ވިޝުއަލައިޒް ކުރުމަށްޓަކައި ޖެލް އެއް ކޫމާސީ ބްރިލިއަންޓް ބްލޫ (ބަޔޯ-ރެޑް، ޔޫކޭ) އިން ސްޓެއިން ކުރި އެވެ. ދެވަނަ ޖެލްގައި ހުރި ޕްރޮޓީން އިމިއުނޯއެސޭ އަށް މެތަނަލް އެކްޓިވޭޓް ޕޮލިވިނިލައިޑީން ފްލޫރައިޑް (ޕީވީޑީއެފް) މެމްބަރޭން (ތަރމޯ ފިޝަރ ސައިންޓިފިކް، ޔޫކޭ) އަށް ބަދަލުކުރިއެވެ. ޕީވީޑީއެފް މެމްބަރޭން 50 އެމްއެމް ޓްރިސް-އެޗްސީއެލް (ޕީއެޗް 7.6)، 150 އެމްއެމް ނޭސީއެލް، 0.2% (v / v) ޓްވީން-20 އަދި %5 (w / v) ސްކިމްޑް ކިރު ޕައުޑަރުގައި ބްލޮކްކޮށް، އެންޓި-ހިސް ޕްރައިމަރީ އެންޓިބޮޑީ (އިން ޑައިލޫޓް ދަ އެންޓިބޮޑީ ބަފަރ [50 އެމްއެމް ޓްރިސް-އެޗްސީއެލް (ޕީއެޗް 7.6) ގައި) އިންކިއުބޭޓް ކުރިއެވެ. 150 mM NaCl އަދި 0.05% (v/v) Tween-20] 1:1000 A190-114A، Bethyl Laboratories, USA) ގައި 4 ގަޑިއިރު ވަންދެން ބެހެއްޓުން. އެންޓިބޮޑީ ބަފަރުގައި 5 މިނެޓް ވަންދެން 3 ފަހަރު ދޮވުމަށްފަހު، މެމްބަރޭން ހޯރސެރެޑިޝް ޕެރޮކްސިޑޭޒް (ސިގްމާ-އަލްޑްރިޗް، ޔޫކޭ) އެންޓި-މައުސް ސެކަންޑަރީ އެންޓިބޮޑީ (އެންޓިބޮޑީ ބަފަރުގައި 1:10،000 ޑައިލޫޓްކޮށްފައި) އާއި ގުޅުވައިގެން ޑިޓެކްޓް ކުރެވޭތޯ (އެންޓިބޮޑީ ބަފަރުގައި 3 މިނެޓް ފަހުން 5 މިނެޓް ފަހުން) އިންކިއުބޭޓް ކުރިއެވެ (ސައިނަޖެން، އިޓަލީ) އާއި އަމަރޝަމް އިމޭޖަރ 600 (ޖީއީ ހެލްތްކެއާ، ޔޫކޭ) އެވެ.
ކޮންމެ ސްޓޭންޑް ޖެލް ނުވަތަ އިމިއުނޯއެސޭ ލޭންގެ އިންޓެންސިޓީ ޑިސްޓްރިބިއުޝަން ކުރަހާ، ޕީކްގެ ދަށުގައިވާ ސަރަހައްދު އިންޓަގްރޭޓްކޮށް، އާރްސީ-އެލް (ސްޓޭންޑް ޖެލް) އަދި ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު (އިމިއުނޯއެސޭ) ގެ އިންޓެންސިޓީ ރޭޝިއޯ ހޯދައި، އިމޭޖްޖޭ (57) ގައި އިމޭޖް ޕްރޮސެސް ކުރާށެވެ. މި ނިސްބަތްތައް މޮލާރ ރޭޝިއޯތަކަށް ބަދަލުކޮށްފައިވަނީ ސާފު އާރްސީ-އެލްއެޗް114-ޑަބްލިއު ސާމްޕަލްގައި އާރްސީ-އެލް އާއި ޕްރޮޓީން-ޑަބްލިއު ގެ ނިސްބަތް 1:1 ކަމަށް ގަބޫލުކޮށް، އެއަށް ރިއާޔަތްކޮށް މުޅި ޑޭޓާ ސެޓް ނޯމަލައިޒްކޮށްގެންނެވެ.
މި ލިޔުމަށް ބޭނުންވާ ސަޕްލިމެންޓަރީ މެޓީރިއަލްސް http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/7/3/eabe2631/DC1 އަށް ބައްލަވާށެވެ
މިއީ ކްރިއޭޓިވް ކޮމަންސް އެޓްރިބިއުޝަން ލައިސަންސްގެ ޝަރުތުތަކުގެ ދަށުން ބެހިފައިވާ އޯޕަން އެކްސެސް އާޓިކަލެކެވެ. އެ ލިޔުމުގައި ކޮންމެ މީޑިއަމެއްގައި ވެސް ހަނިކަމެއް ނެތި ބޭނުންކުރުމާއި، ބެހުމާއި، ރިޕްރޮޑަކްޓް ކުރުމުގެ ހުއްދަ ދީފައިވަނީ އަސްލު މަސައްކަތް ރަނގަޅަށް ނަކަލުކޮށްފައިވާ ޝަރުތުގައެވެ.
ނޯޓް: އަޅުގަނޑުމެން ހަމައެކަނި އެދެނީ އީމެއިލް އެޑްރެސް ފޯރުކޮށްދިނުމަކީ ޕޭޖަށް ރެކޮމެންޑް ކުރާ މީހާއަށް އެނގޭނެ ގޮތަށް، އީމެއިލް ފެންނަން ބޭނުންވާ ކަމާއި އެއީ ސްޕޭމް ނޫންކަން އެނގޭނެ ގޮތަކަށެވެ. އަޅުގަނޑުމެން އެއްވެސް އީމެއިލް އެޑްރެހެއް ކެޕްޗަރ ނުކުރާނަން.
މި ސުވާލަކީ ޒިޔާރަތްކުރާ މީހެއްތޯ ޓެސްޓްކޮށް، އޮޓޮމެޓިކުން ސްޕޭމް ހުށަހެޅުން ހުއްޓުވުމަށް ބޭނުންކުރާ ސުވާލެކެވެ.
ޑޭވިޑް ޖޭކޭ ސްވޮއިންސްބަރީ، ޕާކް ކިއަން، ފިލިޕް ޖޭ ޖެކްސަން، ކޭޓްލީން އެމް ފަރީސް، ޑަރިއަސް އެމް ނިއެޑްޒްވިއެޑްޒްކީ، އެލިޒަބަތު ސީ މާޓިން، ޑޭވިޑް އޭ ފާމަރ، ލޯރނާ އޭ މެލޯން، ރެބެކާ އެފް ތޮމްޕްސަން، ނީލް އޭ ރެންސަން، ޑޭނިއަލް ޕީ ކެނިފް , މާކް ޖޭ ޑިކްމަން، ޑިވީ ހޯލްޓެން، ކްރިސްޓީން ކިރްމަޔަރ، އެންޑްރޫ ހިޗްކޮކް، ސީ ނީލް ހަންޓަރ
ރިއެކްޝަން ސެންޓަރުގައި ހުންނަ ލައިޓް ޓްރެޕް 1 ކޮމްޕްލެކްސްގެ ހައި ރިޒޮލިއުޝަން ސްޓްރަކްޗަރ އިން ކިނޯން ޑައިނަމިކްސް އަށް އާ ވިސްނުންތަކެއް ލިބިގެންދެއެވެ.
ޑޭވިޑް ޖޭކޭ ސްވޮއިންސްބަރީ، ޕާކް ކިއަން، ފިލިޕް ޖޭ ޖެކްސަން، ކޭޓްލީން އެމް ފަރީސް، ޑަރިއަސް އެމް ނިއެޑްޒްވިއެޑްޒްކީ، އެލިޒަބަތު ސީ މާޓިން، ޑޭވިޑް އޭ ފާމަރ، ލޯރނާ އޭ މެލޯން، ރެބެކާ އެފް ތޮމްޕްސަން، ނީލް އޭ ރެންސަން، ޑޭނިއަލް ޕީ ކެނިފް , މާކް ޖޭ ޑިކްމަން، ޑިވީ ހޯލްޓެން، ކްރިސްޓީން ކިރްމަޔަރ، އެންޑްރޫ ހިޗްކޮކް، ސީ ނީލް ހަންޓަރ
ރިއެކްޝަން ސެންޓަރުގައި ހުންނަ ލައިޓް ޓްރެޕް 1 ކޮމްޕްލެކްސްގެ ހައި ރިޒޮލިއުޝަން ސްޓްރަކްޗަރ އިން ކިނޯން ޑައިނަމިކްސް އަށް އާ ވިސްނުންތަކެއް ލިބިގެންދެއެވެ.
©2021 އެމެރިކަން އެސޯސިއޭޝަން ފޯރ ދަ އެޑްވާންސްމަންޓް އޮފް ސައިންސް. ހުރިހާ ހައްޤުތަކެއް ލިބިގެންވެއެވެ. އޭއޭއޭއެސް އަކީ ހިނާރީ، އަގޯރާ، އޮއާރޭ، ކޯރަސް، ކްލޮކްސްއެސް، ކްރޮސްރެފް އަދި ކައުންޓަރުގެ ޕާޓްނަރެކެވެ. ސައިންސްއެޑްވާންސެސް އައިއެސްއެސްއެން 2375-2548.